Началось разобрать по составу: Страница не найдена

1. На какие вопросы отвечает имя числительное?

А) кто? что?

Б) какой? чей?

В) какой? сколько?

Г) что делать? что сделать?

2. Найдите словосочетание с числительным.

А) «тройка» за ответ;

Б) третий по списку;

В) утроить усилия;

Г) трёхэтажный дом;

3. Найдите собирательное числительное.

А) двадцать учеников;

Б) две десятых урожая;

В) одиннадцать экземпляров;

Г) двое очков;

4. В каких числительных мягкий знак пишется на конце?

А) от 5 до 20; 30;

Б) от 5 до 20;

В) от 5 до 30;

Г) от 5 до 25;

5. С какими существительными не согласуется собирательное числительное?

А) двое учеников;

Б) двое учениц;

В) трое лисят;

Г) трое ножниц;

6. Найдите простое числительное.

А) двадцать пять;

Б) сорок четыре;

В) пятьсот пятьдесят семь;

Г) одиннадцать;

7. Найдите числительное с неверным окончанием.

А) в ста метрах;

Б) с девяносто литрами;

В) в сорока сочинениях;

Г) из ста лыж;

8. В каком ряду все слова являются именами числительными?

А) три пятых, полтора, семь, полуторный

Б) первый, второй, третий, который

В) много, мало, сколько, трижды

Г) двое, обе, полтораста, шестой

9. В каком варианте грамматические признаки числительного определены неправильно?

А) пятьдесят — количественное числительное, сложное

Б) сто первый — порядковое числительное, составное

В) семерых — собирательное числительное в форме мужского рода предложного падежа

Г) одному — количественное числительное в форме мужского рода единственного числа дательного падежа

10. В каком варианте содержится ошибка в определении грамматических признаков выделенных в предложении числительных?

Особенно тяжелыми были для него четыре года от тысяча восемьсот шестьдесят пятого до тысяча восемьсот шестьдесят девятого, которые, может быть, стоили четырех лет каторги.

А) четыре — числительное, количественное, простое, в форме именительного падежа, входит в состав подлежащего

Б) тысяча восемьсот шестьдесят пятого — числительное, порядковое, составное, в форме родительного падежа, мужского рода, единственного числа, входит в состав определения

В) тысяча восемьсот шестьдесят девятого — числительное, порядковое, составное, в форме родительного падежа, мужского рода, единственного числа, входит в состав определения

Г) четырех — числительное, количественное, простое, в форме дательного падежа, входит в состав дополнения.

                                                                                  Ответы:

Определение разборки Merriam-Webster

разобрали; разборка; разбирает

переработанных зданий: как проектировать под разборку | Возможности

Архитектурные фирмы и их клиенты все больше осознают воздействие своих зданий на окружающую среду, начиная с показателей жизненного цикла и заканчивая экономическими и экологическими издержками, связанными с выбрасыванием качественных использованных компонентов. Согласно CDRA, в США ежегодно производится более 500 миллионов тонн восстанавливаемых строительных материалов и материалов для сноса, включая бетон, гипсокартон, древесину и металлы, подавляющее большинство которых попадает на свалки. В статье этого месяца задается вопрос: а что, если мы с самого начала проектировали для разборки? Я разговариваю с Андерсом Лендагером из Lendager Group, датской фирмы, работающей над экономикой замкнутого цикла, давая переработанным и переработанным строительным материалам новую жизнь в своих зданиях.Я также общаюсь с ученым-строителем Брэдли Гаем, который более двадцати лет выступает за проектирование с разборкой (DfD), с целью предложить архитекторам общие предложения, чтобы их здания были готовы к концу с самого начала.

Чистый объем материалов, циркулирующих в строительной отрасли США, огромен — по оценкам Института мировых ресурсов, 80% всех материалов и минералов, находящихся в обращении в американской экономике, потребляется строительной отраслью. Согласно отчету Управления по сохранению и восстановлению ресурсов за 2016 год, около 70% строительных отходов — это бетон, подавляющее большинство из которых вывозится на землю и сбрасывается на свалки по всей Америке.

Хотя может показаться неизбежным, что такая ресурсоемкая отрасль обязательно приведет к образованию значительных объемов отходов, согласно последней оценке Агентства по охране окружающей среды США, 92% отходов, образующихся в результате строительства в США каждый год, является результатом ремонта зданий. и снос, а не новые схемы строительства.Можно ли с самого начала спроектировать некоторые из этих отходов?

Вашингтонский ученый-строитель и доцент Брэдли Гай убежден, что проектирование с разборкой (DfD) — важный инструмент, которым архитекторы должны обладать для уменьшения объема и воздействия строительных отходов не только на окружающую среду, но и на будущее клиента. финансовые ресурсы. Гай — один из немногих ученых-строителей, которые изучили деконструкцию как с практической, так и с академической точки зрения, включая уникальные исследования воздействия материалов и времени, необходимого для разрушения здания с использованием современных методов.

Эффективно проектируя для будущего повторное использование, ремонт и переработку компонентов здания, Гай предполагает, что архитекторы могут изменить объем отходов, производимых застроенной средой. «Целью DfD является проектирование зданий для облегчения будущих изменений и возможного демонтажа (частично или полностью) для восстановления систем, компонентов и материалов», — объясняет Гай. «DfD предлагает гибкость, конвертируемость, добавление и вычитание целых зданий. Многие здания снимаются с участков из-за проводимой перепланировки и их неспособности оставаться полезными во время этого процесса.Напротив, DfD представляет собой интеллектуальную стратегию минимизации риска устаревания, которая имеет финансовый смысл для клиента и обнадеживает архитектора, который хочет, чтобы их здания оставались полезными ».

Конструкция для разборки (DfD) предлагает гибкость, возможность преобразования, добавления и удаления целых зданий ». Брэдли Гай

В то время как LEED в принципе еще не дает баллов за проектирование для демонтажа, многие национальные системы оценки экологического строительства в настоящее время награждают дизайн для демонтажа, в том числе BREEAM Великобритании и DGNB Германии. «В то время как некоторые штаты приняли Международный кодекс экологического строительства в качестве добровольного дополнения к Международному строительному кодексу, до сих пор США не принимают законодательные акты для DfD», — объясняет Гай. «Однако в системе LEED есть заслуга« гибкости », особенно для сектора здравоохранения. В этом зачете есть три узнаваемые стратегии, которые смотрят в будущее здания в процессе его проектирования. Первый — это «межстраничное пространство», что означает лучшие пути для коммунальных служб и служб; затем «мягкое пространство», то есть доступ к незапрограммированному пространству внутри корпуса; и, наконец, концепция «расширения», делающая возможным вертикальное или горизонтальное расширение основных систем.”

Эти инновационные стратегии по большей части обусловлены быстро меняющимися потребностями сектора здравоохранения, и Гай надеется, что другие архитектурные направления вскоре последуют их примеру. В настоящее время существуют другие правила, которые оценивают воздействие зданий на окончание срока службы, например токсичность материалов (которая является наиболее строгой в Калифорнии). В Портленде, штат Орегон, в настоящее время действуют постановления о деконструкции и стратегии управления отходами, которые сосредоточены на строительной отрасли, предполагая, что США могут двигаться таким же образом, как и остальной мир, в направлении более строгого регулирования образования и удаления строительных отходов.

Когда Гай работал квалифицированным специалистом по сносу зданий в Калифорнии, Огайо и Детройте, Мичиган, он впервые занялся выпуском томов потенциально ценные строительные отходы отправляются на свалки. «Это заставило меня больше задуматься о том, что происходит со зданиями с течением времени», — объясняет Гай. «Мы отслеживали и количественно оценивали все, что мы разбирали, затраты, труд и время, которое потребовалось.Мы быстро узнали, что такое количество элементов невозможно разобрать и от них нужно утилизировать, что часто было грязной работой. Люди, которые построили эти здания, должно быть, думали, что они будут длиться вечно! Хотя существуют определенные способы сделать деконструкцию более эффективной на уровне детального проектирования, стало ясно, что основным препятствием является подход к строительству — архитекторы просто не думают о ремонте и возможном сносе своих зданий ».

Это заставило меня больше задуматься о том, что происходит со зданиями с течением времени — ясно, что архитекторы просто не думают о ремонте и сносе своих зданий »Брэдли Гай

В то время как любой тип сноса является опасной работой, когда в процессе проектирования не уделяется достаточного внимания материалам и методам строительства или на месте срезаются углы, последствия для соседних населенных пунктов могут быть огромными, а в некоторых случаях смертельными. .Reveal недавно выпустил подкаст, в котором говорилось об опасности использования свинцовой краски при сносе старых зданий. Чтобы сэкономить деньги, во время сноса не распыляли воду, чтобы уменьшить выброс свинцовой пыли в воздух, что имело далеко идущие последствия. «Нет никаких сомнений в том, что нейротоксины влияют на детей, — говорит Гай, — старые здания могут содержать свинец, асбест, ртуть, древесные консервы, сделанные из мышьяка и цианида, — но вызывает беспокойство химический состав многих композитных материалов, которые архитекторы заказывают. сегодня они более сложные и могут содержать вредные загрязнители.«Чтобы добавить к этой токсичности, по причинам стоимости компоненты часто приклеиваются на месте с использованием экологически неустойчивых клеев и смол.

Дизайн от колыбели до колыбели — возник в сфере дизайна продукции и частично обусловлен осознанием потребителями экономического и экологического воздействия материалов используется в потребительских товарах — был популяризирован в архитектурной дисциплине в книге Уильяма МакДоноу 2002 года «От колыбели до колыбели: переделывая то, как мы делаем вещи».В настоящее время эта концепция используется в практике нескольких избранных архитектурных студий, одной из которых является Lendager Group, которая намеревалась стать ведущим бюро устойчивой архитектуры в Дании. В их проектах используются местные и переработанные материалы, чтобы свести к минимуму потерянный потенциал в «строительной экосистеме», при этом соблюдая строгие технические и законодательные требования, предъявляемые сегодня к любому архитектурному бюро.

Lendager Group к экономике замкнутого цикла вызван их давним разочарованием в области устойчивой архитектуры и желанием изменить отрасль изнутри.«Проблема, с которой мы неоднократно сталкивались, заключалась в том, что для создания« устойчивого здания »вам нужно было добавить немного технологий после завершения проектирования, что, следовательно, было более дорогостоящим для клиента», — объясняет архитектор и основатель Андерс Лендагер. «Это по-прежнему остается ключевой дилеммой для архитекторов, желающих убедить клиентов в преимуществах экологичного дизайна. Мы считаем, что инновации должны происходить в процессе проектирования, что для нас означает полное переосмысление того, как этот процесс осуществляется.”

Lendager Group называет себя организацией-связующим звеном, поскольку состоит из трех отдельных предприятий, каждое из которых работает над достижением общей цели — сделать реальную экономику строительства замкнутого цикла. Первая рабочая группа называется «консалтингом по стратегическому менеджменту», вторая — архитектурной студией (далее подразделяется на рабочие группы, ориентированные либо на строительство, либо на город), а третья сосредоточена на исследовании материалов и инновациях, работая над созданием и переработкой продукты для использования в их зданиях.Эта необычная мультидисциплинарная бизнес-модель позволяет Legander Group сохранять контроль над своими архитектурными решениями и обеспечивать их соответствие собственным стандартам устойчивого развития, включая сокращение выбросов CO2, использования воды и токсичности.

Вопрос, который мы задаем, — что может вдохновить архитектуру на поиск ответов на изменение климата и более широкие геополитические вопросы с помощью местных решений? » Андерс Лендагер

«Вопрос, который мы задаем, — что может вдохновить архитектуру на поиск ответов на изменение климата и более широкие геополитические вопросы с помощью местных решений?», — спрашивает Лендагер. «К сожалению, в нашем обществе мы решили строить здания, где короткие сроки ремонта и низкие первоначальные затраты являются двумя наиболее важными факторами. Но реальность такова, что позже этот подход приведет к гораздо более высоким расходам, как финансовым, так и экологическим. Когда здания разбираются, их составляющие материалы могут не исчерпать свой срок службы, что приводит к огромным потерям потенциала. Только когда мы начали составлять каталоги материалов существующих сайтов, мы осознали истинную ценность материалов, которые должны быть списаны, — продолжает Лендагер, — поэтому ключевой целью нашего офиса стало использование этого материального потенциала, который мы называем «налог» или «данные», хранящиеся в балках.Вот почему мы создали наше консультационное подразделение, чтобы заложить основу для технических проблем, таких как пожарные и строительные нормы, чтобы найти новые способы удовлетворения требований и законодательства о том, как разбирать вещи ».

Проект станции повторного использования Lendager Group, местного центра переработки, построенного в районе Нордхавн в Копенгагене, направлен на то, чтобы бросить вызов общественному мнению об отходах, чтобы вместо этого рассматривать их как ресурс для строительства. «Мы хотели показать, что все в проекте может быть сделано из местных отходов. Понятно, что муниципалитет посчитал нас сумасшедшими », — вспоминает Лендагер. Тем не менее, когда они начали собирать отходы в кучи одного типа, они обнаружили, что восприятие изменилось. «Когда мы собрали 1000 бутылок, люди начали видеть потенциальный ресурс», — говорит Лендагер. В то время как Группа настаивала на переработке пластиковых труб в проекте, они остановились на переработке труб, вместо этого заключив соглашение о возврате между своим консалтинговым подразделением и субподрядчиком, который предоставил трубы.

Lendager group считает, что для того, чтобы дизайн был устойчивым, он также должен быть коммерчески жизнеспособным, концепция, которая будет дополнительно исследована в их предстоящем проекте Circle Houses. Цель Circle Houses — создать дизайн, в котором компоненты каждого дома можно будет постоянно использовать повторно. «Редко можно разобрать здания для прямого повторного использования, — объясняет Лендагер, — проектируя архитектуру с доступными стыками, чтобы их можно было разобрать — мы как бы забыли, что это было возможно. «Circle Houses стремятся достичь DfD за счет минимизации основных компонентов и использования поддающихся деконструкции соединений. Результат отражен в архитектурной тектонике проекта, который Лендагер назвал «орнаментом». «Мы стремимся продумать следующие пять проектов, которые могут быть построены из этих материалов, пока мы проектируем», — предполагает Лендагер, — «если здание можно собрать только само по себе, это неизбежно приведет к потере потенциала».

Нам нравится думать, что мы используем материальный потенциал, который мы называем «налогом» или «данными», хранящимися в лучах.”Андерс Лендагер

Этот подход к строительству был описан Гаем в его контрольном листе дизайна для деконструкции, и он отметил, что определенные проекты и архитектурные движения приспособлены к DfD, несмотря на то, что общепризнанно, что они это не делают. Например, в отделке здания Seagram в Нью-Йорке, созданного Мисом ван дер Рошем, используются чистые материалы, такие как металл, стекло, камень и бетон, что открывает в будущем возможности для прямой переработки и повторного использования. В своем исследовании Гай подчеркивает, что использование соединений, таких как болты, в качестве «ключевых ингредиентов модернизма» как ценная «потенциальная традиция деконструкции».

В свою очередь, Гай предлагает стиль архитектуры хай-тек, который включает работы Ричарда Роджерса и Ренцо Пиано, а также демонстрирует основные принципы DfD. «Эти конструкции выворачивают традиционные слои внутренних механических и инженерных систем наизнанку, используя конструкцию в качестве арматуры, на которой размещаются механические, водопроводные и электрические системы. Эти конструкции обеспечивают открытые гибкие планы этажей внутри оболочки здания. Само собой разумеется, что DfD также является неотъемлемой частью современных выставочных павильонов, развлекательных сооружений и военных объектов, используемых для быстрого развертывания и временного использования.Хотя это могут быть наиболее распространенные примеры текущей практики DfD, они могут предоставить ценные концепции для проектирования более постоянных типов зданий ».

Приоритизация DfD в процессе архитектурного проектирования дает множество явных преимуществ, таких как поддержка вторичного использования компонентов, снижение потребляемой энергии и экологически безопасные методы производства материалов (которые также обеспечивают лучшее качество воздуха в помещении в течение всего срока службы. Building), а также позволяет адаптировать дизайн к нескольким программам, технологическим обновлениям и физическим конфигурациям в течение всего срока службы.Но есть и ключевые недостатки у подхода DfD в сегодняшней строительной отрасли, которые Гай отмечает в своем исследовании. Например, есть общие тенденции в сторону от ремесленных навыков, необходимых для создания открытых соединений и деталей, вместо этого предпочтение отдается гвоздям, скобам и клеям с пневматическим приводом, которые требуют слишком много времени для разрушения, что часто приводит к их утилизации. Он также отмечает более широкое использование композитов и технических продуктов, которые трудно переработать из-за их химической сложности.Обе тенденции, по его мнению, обусловлены «весьма спекулятивным характером большинства зданий, в результате чего отсутствует долгосрочное владение и, следовательно, первоначальный владелец не несет затрат на адаптацию, реконструкцию и снос».

Однако Гай рассматривает DfD как полезный инструмент для архитекторов, работающих сегодня и в будущем, поскольку он считает, что у архитекторов все еще есть возможность взять на себя роль арбитра для других субподрядчиков и возможность влиять на то, что является экономически и экологически безопасным. лучшее решение для своих клиентов.Хотя строительная отрасль вряд ли изменится в одночасье, есть несколько небольших шагов, которые может предпринять любой архитектор или дизайнер, чтобы убедиться, что он задумывается о том, как его здание работает как в течение его срока службы, так и когда оно больше не используется. В качестве краткого руководства я разделил их на «структурную стратегию», «тщательный выбор материалов» и «проектирование деталей». Полный текст контрольного списка Гая по разборке можно прочитать здесь.

В высшей степени спекулятивный характер большинства зданий, в связи с чем они не находятся в долгосрочном владении и, следовательно, затраты на адаптацию, реконструкцию и снос не покрываются первоначальным владельцем.”Брэдли Гай

Структурная стратегия

Это может показаться очевидным, но чтобы обеспечить подготовку здания к будущей разборке, архитекторы должны участвовать в проектировании конструкций с самого начала проекта и оставаться вовлеченными на протяжении всего процесса проектирования. В случае необходимости, структурный каркас должен быть адаптируемым, чтобы обеспечить как можно более длительный срок службы здания. Как сделать ваш дизайн более адаптируемым к изменению потребностей людей? Разработан ли он для простоты обслуживания, без механических элементов, которые легко ломаются со временем?

«В зависимости от типа вашего проекта и потребностей клиента, — предполагает Гай, — строительство и сборные конструкции за пределами строительной площадки могут быть полезными системами, поскольку они приближают архитектора к процессу строительства». Однако это может быть не тем, чем кажется на первый взгляд, поскольку часто модульные здания нелегко транспортировать из-за стресса, возникающего при перемещении их на грузовике, что приводит к поломкам, которые часто устраняются с помощью клея ». Может быть, есть лучший способ спроектировать компоненты модульной конструкции, чтобы они выдерживали удары, например, панельные конструкции, собираемые на месте?

Тщательный выбор материалов

При выборе материалов учитывайте их токсичное наследие — они высокого качества? Крепкий? Легко использовать повторно или перерабатывать? В некоторой степени корпоративные клиенты движут здесь рыночный сдвиг из-за своего желания продвигать «зеленый имидж» своих компаний.«Архитекторам необходимо знать все материалы, которые они вводят в строй в здании, — предлагает Гай, — и весь фокус в том, чтобы начать активное обсуждение с подрядчиками как можно раньше, поскольку большая часть затрат на проектирование и строительство предопределена на начальном этапе. этап проектирования ». В моей собственной практике, хотя у меня есть некоторые оговорки по поводу использования BIM, я заметил, что некоторые инструменты 3D-моделирования могут помочь в этом отношении, поскольку они могут создавать автоматические спецификации компонентов, подчеркивая характер и количество каждого материала в дизайне.Некоторые надстройки для программ BIM теперь также могут оценивать воплощенную энергию различных вариантов дизайна.

Проектирование деталей

«Важно не оставлять это на усмотрение подрядчика, — подчеркивает Гай, — и вместо этого возьмите рабочий проект в свои руки, если вы хотите спроектировать его для разборки. Важно, чтобы тот, кто разбирает здание, должен иметь доступ к ключевым структурным соединениям ». Лендагер соглашается: «Два самых важных момента, которые архитекторы должны иметь в виду при проектировании, — это разборка компонентов и разборка материалов.Логистика компонентов должна быть движущей частью дизайна для создания по-настоящему экологичного здания. Это означает понимание 1: 1 деталей того, как это будет построено, как неотъемлемой части вашей методологии работы. В свою очередь, вы должны учитывать долговечность ваших материалов. Кирпичи очень многоразовые и могут выдерживать более 400 лет, будучи «переработанными» многими ранее немыслимыми способами. Это делает его интеллектуальной системой ». Как правило, Гай также предлагает избегать скрытых соединений и по возможности использовать стандартные стальные и деревянные отрезки.

Возьмите детальный дизайн в свои руки, если хотите спроектировать под разборку. Важно, чтобы тот, кто разбирает здание, должен иметь доступ к ключевым структурным соединениям »Bradley Guy

Вместо того, чтобы быть посвященным конкретной строительной технике или архитектурному стилю, проектирование для разборки может рассматриваться как процесс разработки методов и сборок, чтобы максимально использовать строительные материалы, одновременно увеличивая возможности для ремонта, повторного использования и переработки в дальнейшем. .Гай предполагает, что «здания следующего поколения должны будут отражать более целенаправленный характер непрерывного материального цикла, если они хотят быть устойчивыми в долгосрочной перспективе». Он прогнозирует, что в США школьный и медицинский секторы будут в состоянии взаимодействовать с DfD и продвигать его, поскольку качество воздуха в помещениях и долговечность являются первоочередными задачами их клиентов и общественности.

Если стоимость захоронения отходов, а также производство и импорт первичных материалов будут продолжать расти, вполне вероятно, что DfD также будет играть более значительную роль в секторе коммерческой архитектуры в следующие десятилетия.Через тридцать лет будет ли здание, над которым вы сейчас работаете, все еще стоять, или оно будет опасным дополнением к свалке? Выдержат ли указанные вами материалы испытание временем и будут ли их части преобразованы в типологию, которую еще нельзя было представить?

Выбери свои слова: Vocabulary.com

Разобрать — это что-то разобрать, например, старый автомобильный мотор, но лицемерить один снова вместе.

Разобрать состоит из разобрать, означает разворот, и собрать, собрать вместе. Разобрать, значит разобрать что-то в прямом или переносном смысле:

Выйдя на орбиту Луны, ракета была дополнительно разобрана , что позволило двум астронавтам Аполлона исследовать поверхность Луны. ( Scientific American )

Законодатели, конечно же, могут свободно разбирать свои Франкенбиллы и принимать меры отдельно.( Чикаго Трибьюн )

Но г-н Уокер и лидеры республиканцев заявили, что разобрать профсоюзов вовсе не было смысла. ( Нью-Йорк Таймс )

Dissemble , что означает сокрытие своих убеждений или чувств, имеет менее прямое нарушение. (Почему оно должно быть прямым? Оно любит скрывать!) Оно происходит от латинского disimulare, означает скрывать, от dis — для полностью и simulare , что означает притворяться. Если вы полностью притворяетесь, что верите во что-то другое, чем вы на самом деле, вы — лицемер :

Фотографии всегда лицемерны — есть миллионы снимков, на которых несчастные семьи храбро ухмыляются, — но теперь они прямо лгут. ( Хранитель )

Разве это не проклятие власти, навечно вынужденной скрывать и скрывать и лицемерить ? ( Нью-Йорк Таймс )

Воистину сладкая религия, которая обязывает людей притворяться и лгать как Богу, так и людям для спасения своих душ! ( Джон Локк )

Откажитесь от dis , и их легко сохранить прямыми: (разобрать), собрать — это противоположность , собрать , а (разобрать), собрать — это не походить на самому.

% PDF-1.3 % 1 0 объект > эндобдж 2 0 obj > / Тип / Каталог / Метаданные 813 0 R >> эндобдж 3 0 obj > поток 1. 000 г / GS2 GS 9.000 689.000 м 9.000 689.000 л ж 0,000 0,000 0,000 0,000 к / GS3 GS 1 я 192.894 656.559 45.354 -45.354 об. 0,015 698,310 м е * 0,000 0,000 0,000 мкг / GS2 GS 216,318 656,289 м 216.356 652.545 217.748 649.056 219.921 645.979 c 219.787 645.705 220.226 645.790 220.150 645.550 c 222.189 642,593 224,342 639,531 226,019 636,438 в 227.010 634.402 227.659 632.027 227.698 629.718 c 227.640 627.513 227.067 624.913 225.961 622.896 c 223.961 619.015 219.388 616.808 215.043 616.638 c 217.025 618.655 217.272 621.340 216.090 623.767 c 213.516 628.094 210.391 632.128 210.506 637.173 c 210.735 639.071 210.943 641.088 211.440 642.952 c 211.020 639.174 213.574 635.428 216.205 632.367 c 218.702 630.094 220.208 627.718 221.254 624.760 в 221,312 624,760 л 221,330 626,845 220,492 628,726 219,693 630.556 с 217,577 635,070 214,832 639,584 214,623 644,576 в 214,489 645,398 214,431 646,132 214,452 646,970 c 215.022 643.055 217.596 639.806 220.093 636.540 в 222,360 633,753 224,171 630,607 224,857 627,273 в 225. 848 630.813 223.961 634.454 222.418 637.635 c 219.730 643.619 216.109 649.449 216.263 656.289 c 216,318 656,289 л ж 214,508 647,124 м 214,452 647,073 л 214,452 647,329 л 214.565 647.295 214.489 647.192 214.508 647.124 c ж 200.977 635.497 м 201.130 636.814 202.139 638.216 203.587 638.831 c 205.056 639,362 л 203,683 637,994 202,826 636,386 200,977 635,497 c ж 229,964 636,642 м 230.021 636.182 230.403 635.616 230.421 635.138 c 228.744 636.010 227.811 637.788 226.421 639.105 c 226,476 639,207 л 227,848 638,797 229,354 637,942 229,964 636,642 в ж 200,634 637,071 м 200.139 635.942 200.081 634.831 199.642 633.685 c 200.234 633.685 200.310 634.402 200.864 634.608 c 201.739 635.086 202.596 635.736 203.359 636.335 c 202.959 634.300 200.386 633.547 199.128 632.010 c 198.919 633.565 198.633 635.566 199.814 636,916 в 200.215 637.207 200.577 637.533 201.035 637.686 в 201.111 637.515 200.749 637.224 200.634 637.071 в ж 232,232 631,650 м 231.107 633.326 228.116 634.095 228.058 636.233 c 228,897 635,019 230,631 634,660 231,527 633,360 в 231,431 634,386 231,070 635,514 230,841 636,489 в 230. 250 637.481 л 232.652 636.335 232.442 633.736 232.232 631.650 в ж 204,922 635,292 м 203.759 631.839 204.903 627.736 208.181 625.494 c 209.038 624.810 210.030 624.179 211.154 623.940 в 211.211 623.990 л 208,657 627.068 208.105 631.273 208.772 634.984 c 208,467 632,043 209,553 629,445 211,154 626,999 c 211.992 625.529 213.594 624.486 214.565 623.204 c 215,442 621,681 215,671 619,818 214,623 618,297 в 214.203 617.869 213.821 617.459 213.288 617.150 c 213,346 617,954 212,526 618,416 211,897 618,877 c 207,876 620,741 203,837 623,957 203,359 628,094 с 203.017 630.625 204.064 633.274 204.922 635.652 c 204.922 635.292 л ж 198,310 629,872 м 198.423 629.770 л 198,881 631,428 200,348 632,061 201,682 633,206 в 201.225 631.155 199.033 629.821 198.365 627.888 c 198,252 627,888 л 197.166 630.077 196.345 633.035 198.195 635.035 c 197.795 633.462 198.709 631.565 198.310 629.872 c ж q 196.071 611.474 39.002 44.815 об. W n 232.939 627.530 м 232.156 629.479 229.964 630.982 229.677 633.052 c 229.869 632.898 230. 232 632.779 230.250 632.469 c 231.204 631.565 232.423 630.813 232.805 629.462 c 233.015 629.906 232.671 630.676 232.862 631.172 c 233.015 632.334 233.336 633.685 233.052 634.933 c 234,920 632,761 233,890 629,821 232.939 627,530 c ж 196,575 629,615 м 197.013 627.958 198.195 626.505 198.537 624.760 c 198.652 624.862 л 197.909 626.777 199.587 628.333 200.520 629.821 c 200.482 627.736 199.109 625.562 199.128 623.357 c 196.879 625.152 195.393 627.974 196.384 630.658 c 196.632 630.351 196.423 629.992 196.575 629.615 c ж 235.073 628.316 м 234.901 626.417 233.700 624.383 232.003 622.998 c 232.061 625.323 230.518 627.256 230.668 629.615 в 231,431 628,282 232,708 626,947 232,691 625,238 c 233,396 626,880 234,348 628,436 234.786 630,180 c 235.188 629.718 234.920 628.914 235.073 628.316 c ж 200.749 625.188 м 201.130 623.187 201.091 621.032 201.911 619.185 в 199.185 620.502 196.041 622.519 196.097 625.648 c 196.270 625.494 л 196,213 625,444 л 196.975 623.580 199.109 622.656 200.234 620.913 c 200.310 620. 895 200.348 620.981 200.406 621.015 c 199.624 622.536 200.081 624.435 200.520 625.853 в 200.749 625.188 л ж Q 230,784 624,982 м 230.955 623.563 231.546 622.110 230.668 620.708 c 230,707 620,639 230,765 620,656 230,841 620.656 с 231.927 622.519 234.156 623.322 235.015 625.238 c 235.015 622.280 232.042 620.331 229.393 618.979 c 229,278 619,083 л 230.174 621.169 229.851 623.649 230.668 625.648 c 230.955 625.460 230.573 625.204 230.784 624.982 c ж 204,694 617,527 м 204.694 617.322 л 204,883 616,996 205,323 616,621 205,571 616,330 в 203.150 616.689 200.444 617.032 198.824 619.031 в 198.310 619.578 197.832 620.142 197.604 620.809 c 198.518 620.006 199.529 619.408 200.577 618.929 c 201.758 618.468 202.959 617.954 203.950 617.202 с 204,122 617,202 л 204.006 617.544 203.454 617.783 203.245 618.193 c 202,444 619,493 202,406 621,032 201,968 622,519 в 203.665 621.186 203.626 619.134 204.694 617.527 c ж 226.954 616.996 м 227,067 616,894 л 228.973 618.638 231.832 618.655 233.452 620.708 c 232.461 617. 800 228.707 616.330 225.486 616.057 c 227.238 617.988 227.259 620.417 229.088 622.264 c 228,897 620,433 228,534 618,297 226,954 616,996 c ж 210.335 615.287 м 207,437 614,535 204,160 613,886 201,625 615,799 с 201.302 616.159 200.920 616,330 200,804 616,791 в 202,769 615,527 205,264 615,766 207,666 615,595 c 207,495 615,748 л 207,437 615,697 л 206.160 616.467 205.227 617.732 204.865 619.031 c 206.694 617.783 207.934 615.817 210.335 615.287 c ж 225,257 616,996 м 224.818 616.142 223.924 615.612 222.931 615.337 c 223.104 615.235 л 225.638 615.595 227.964 615.304 230.194 616.432 c 228.897 614.826 226.305 613.886 223.866 614.398 c 222.741 614.603 221.711 615.031 220.550 615.185 c 221,217 615,391 221,883 615,561 222,476 615,903 в 223.790 616,843 224,876 617,954 226,248 618,775 c 226.171 618.193 225.543 617.561 225.257 616.996 c ж 215,442 614,911 м 218.282 615.920 220.607 614.279 223.104 613.714 c 223.351 613.424 223.809 613.646 224.095 613.458 c 225.009 613.321 226.115 613.424 226.954 613.765 c 226. 363 613.133 225.525 612.807 224.629 612.517 c 222.189 612.039 219.940 613.355 218.053 614.603 в 217.616 614.826 216.873 614.843 216.434 614.603 c 217.995 613.954 219.139 612.859 220.492 612.005 с 220,358 611,765 220,129 611,646 219.864 611,474 c 218,434 612,602 217,501 613,765 215,843 614,398 в 214,546 614,466 213,498 613,542 212,546 612,825 c 211.211 611.577 л 210.964 611.646 210.659 611.696 210.562 611.953 c 210.562 612.209 л 211.878 613.099 213.136 614.073 214.565 614.705 c 212.869 615.200 211.859 613.954 210.506 613.303 c 208.905 612.569 206.771 612.209 205.169 613.201 c 204,770 613,321 204,370 613,696 204,122 613,919 в 205.151 613.646 206.409 613.355 207.553 613.765 c 210.068 614.244 212.698 616.177 215.442 614.911 c ж 0.000 0,000 0,000 0,000 к / GS3 GS 252.421 648.055 45.355 -36.850 об. е * 0,000 0,000 0,000 1.000 к / GS2 GS q 45.091 0 0 34.852 252.552 612.204 см / Im1 Do Q 0,000 0,000 0,000 0,000 к / GS3 GS 192.894 608.370 45.354 -8.504 об. е * BT / F2 1 Тс 6 0 0 6 204,5713 602,9384 тм 0,000 0,000 0,000 1. 000 к 0,0001 Тс 0.0000 Tw () Tj ET 0,000 0,000 0,000 0,000 к 192.894 156.244 45.354 -39.685 об. 226,571 602,938 м е * 0,000 0,000 0,000 1.000 к / GS2 GS 206,008 139,821 м 209,175 139,750 л ж 216,908 137,076 м 216,811 136,495 л 216.767 136,354 216,521 136,354 в 216.275 136.354 216.178 136.302 л 216.081 135.967 л 216.618 135.914 л 217.154 135.818 217.102 136.011 в 217.049 136.205 217.102 136.020 217.102 136.354 в 217.102 136.689 217.154 136.583 217.102 136.829 c 217.049 137.076 216.908 137.076 г ж 202,981 154,531 м 200.025 152.912 199.110 150.378 в 198.670 149.102 203.174 153.317 202.981 154.531 c ж 199,110 153,264 м 196,413 150,890 196,876 147,517 в 197.052 146.231 196.999 145.803 г 198.045 146.894 200.236 148.759 в 201.996 150.237 201.985 151.269 л 200.719 150.811 197.632 147.492 в 197.424 147.269 198.565 151.390 199.110 153.264 c ж q 192.894 156.244 45.354 -39.685 об. W * n 195.943 149.956 м 194.342 146.929 194.887 143.199 в 194.957 142.706 195.239 141.932 195.521 140.173 c 195.547 139. 847 196.435 141.791 197.421 142.777 c 198.406 143.762 199.673 147.070 г 196.999 144.466 196.717 143.903 в 196.435 143.340 195.943 142.354 г 196.084 143.973 196.084 146.296 в 196.084 148.618 195.943 149.956 г ж 193,127 144,325 м 192.564 140.876 194,535 137,498 в 195.608 135.668 196.084 135.246 196.154 135.035 в 196.224 134.824 197.210 137.850 197.702 139.187 c 198.406 141.079 197.984 142.495 л 196,858 140,384 196,576 139,117 в 196.295 137.850 195.732 136.653 г 195.872 137.357 195.169 139.117 в 194.465 140.876 193.127 144.325 г ж Q 197.632 131.304 м 197.350 131.797 195.661 134.472 195.028 134.964 c 194.394 135.457 193.479 137.217 л 193.664 134.313 195.098 132.712 в 196.242 131.454 197.544 130.486 198.265 129.756 в 198.758 129.263 198.547 129,334 г. 199.040 133.134 198.758 135.950 в 198.556 137.947 198.195 138.343 г 197.562 135.175 197.702 133.416 в 197.843 131.656 197.913 130.812 197.632 131.304 c ж 201,081 125,533 м 200.658 125.885 198.969 127.715 197.632 128.630 в 196.295 129.545 194.676 131. 656 г 195.793 127.108 197.913 126.096 в 199.673 125.252 201.503 124.829 201.785 124.689 c 202.066 124.548 202.277 124.618 г 202.277 127.574 201.081 130.178 в 199.884 132.782 199.603 133.275 199.603 132.923 c 199,603 132,571 199,462 130,389 199.955 128,982 c 200,447 127,574 201,010 126,730 201,151 126,237 в 201.292 125.744 201.503 125.181 201.081 125.533 в ж 197,773 125,392 м 198.758 124.126 201.855 123.633 в 204,125 123,272 204,529 122,859 205,233 122,718 в 205.937 122.577 206.148 122.647 г 204.107 124.337 203.263 126.167 в 202.418 127.996 202.488 128.559 г 204.459 127.011 204.952 126.237 v 205,444 125,463 206,430 123,633 206,993 122,929 в 207.556 122.225 207.556 122.155 г 204.741 121.029 202.136 121.873 в 199.532 122.718 197.773 125.392 л ж 220.366 117.017 кв.м 220.383 116.977 221.069 117.369 г 218,395 120,395 214,946 120,888 в 212.483 121.451 210.794 121.521 в 209,104 121,592 207,697 120,817 205,937 120,325 в 204.178 119.832 201.503 120.606 л 202.488 119.340 204.881 119.128 в 207,274 118,917 209,527 119,551 211,286 120,114 в 213,103 120,695 214,149 120,763 214,764 120,632 в 218,893 120,462 220,366 117,017 в ж 228,164 154,531 м 231. 120 152.912 232.035 150.378 в 232,475 149,102 227,971 153,317 228,164 154,531 в ж 232,035 153,264 м 234,731 150.890 234,269 147,517 в 234.092 146.231 234.146 145.803 г 233.099 146.894 230.908 148.759 в 229.149 150.237 229.160 151.269 г 230.426 150.811 233.513 147.492 в 233.720 147.269 232.580 151.390 232.035 153.264 c ж q 192.894 156.244 45.354 -39.685 об. W * n 235,202 149,956 м 236.803 146.929 236.258 143.199 в 236,187 142,706 235,906 141,932 235,624 140,173 с 235,598 139,847 234,709 141,791 233,724 142,777 c 232.738 143.762 231.472 147.070 г 234.146 144.466 234.428 143.903 в 234.709 143.340 235.202 142.354 г 235.061 143.973 235.061 146.296 v 235.061 148.618 235.202 149.956 г ж 238,017 144,325 м 238,580 140,876 236,610 137,498 в 235.536 135.668 235.061 135.246 234.991 135.035 c 234.920 134.824 233.935 137.850 233.442 139.187 c 232.738 141.079 233.161 142.495 г 234.287 140.384 234.568 139.117 в 234.850 137.850 235.413 136.653 г 235.272 137.357 235.976 139.117 в 236.680 140.876 238.017 144. 325 г ж Q 233,513 131,304 м 233.794 131.797 235.483 134.472 236.117 134.964 c 236.750 135.457 237.665 137.217 г 237.481 134.313 236,046 132,712 в 234.903 131.454 233.601 130.486 232.879 129.756 в 232.387 129.263 232.598 129.334 г 232.105 133.134 232.387 135.950 в 232.589 137.947 232.950 138.343 л 233,583 135,175 233,442 133,416 в 233,302 131,656 233,231 130,812 233,513 131,304 c ж 230,064 125,533 м 230,486 125,885 232,175 127,715 233,513 128,630 в 234.850 129.545 236.469 131.656 г 235.351 127.108 233.231 126.096 в 231,472 125,252 229,642 124,829 229,360 124,689 в 229.079 124.548 228.868 124.618 г 228,868 127,574 230,064 130.178 v 231,261 132,782 231,542 133,275 231,542 132,923 c 231,542 132,571 231,683 130,389 231,190 128,982 с 230.698 127.574 230.134 126.730 229.994 126.237 c 229,853 125,744 229,642 125,181 230,064 125,533 в ж 233,372 125,392 м 232,387 124,126 229,290 123,633 в 227.020 123.272 226.615 122.859 225.911 122.718 в 225,208 122,577 224,996 122,647 г 227.038 124.337 227.882 126. 167 в 228.727 127.996 228.656 128.559 г 226.686 127.011 226.193 126.237 в 225.700 125.463 224.715 123.633 224.152 122.929 в 223,589 122.225 223,589 122,155 л 226.404 121.029 229.008 121.873 в 231.612 122.718 233.372 125.392 г ж 210,779 117,017 м 210.762 116.977 210.075 117.369 г 212.750 120.395 216.199 120.888 в 218.662 121.451 220.351 121.521 в 222,040 121,592 223,448 120,817 225,208 120,325 в 226.967 119.832 229.642 120.606 г 228.656 119.340 226.263 119.128 в 223,870 118,917 221,618 119,551 219,858 120,114 в 218,042 120,695 216,996 120,763 216,381 120,632 в 212,251 120,462 210,779 117,017 в ж 212,499 139,676 м 212,499 141,414 213.913 142,829 215,651 142,829 в 217,389 142,829 218,804 141,414 218,804 139,676 в 218.804 137.938 217.389 136.524 215.651 136.524 в 213.913 136.524 212.499 137.938 212.499 139.676 c час 212,194 139,676 м 212.194 137.770 213.745 136.219 215.651 136.219 в 217.558 136.219 219.109 137.770 219.109 139.676 c 219,109 141,583 217,558 143,134 215,651 143,134 в 213.745 143. 134 212.194 141.583 212.194 139.676 c ж 215,435 143,019 0,305 12,635 об. ж 204,443 151,072 м 213,418 141,956 л 213,636 142,170 л 204,660 151.286 л 204,443 151,072 л ж 218,032 137,290 м 226.802 128.382 л 227.020 128.596 л 218,249 137,504 л 218.032 137.290 л ж 217,840 142,199 кв.м 218,056 141,984 л 226,878 150,833 л 226.662 151.049 л 217,840 142,199 л ж 204,210 128,584 м 204,425 128,368 л 213,427 137,340 л 213,212 137,556 л 204,210 128,584 л ж 199,841 139,676 м 199,841 148,394 206,933 155,487 215,651 155,487 в 224,369 155,487 231,462 148,394 231,462 139,676 в 231,462 130,958 224,369 123,866 215,651 123,866 в 206,933 123,866 199,841 130,958 199.841 139,676 c час 199,536 139,676 м 199,536 130,790 206,765 123,561 215,651 123,561 в 224,537 123,561 231,767 130,790 231,767 139,676 c 231,767 148,562 224,537 155,792 215,651 155,792 в 206,765 155,792 199,536 148,562 199,536 139,676 в ж 202,814 139,676 м 202,814 146,755 208,572 152,514 215,651 152,514 в 222,730 152,514 228,489 146,755 228,489 139,676 в 228,489 132,598 222,730 126,839 215,651 126,839 в 208,572 126,839 202,814 132,598 202,814 139,676 c час 202,509 139,676 м 202,509 132,430 208,404 126. 534 215.651 126.534 в 222,898 126,534 228,794 132,430 228,794 139,676 в 228,794 146,923 222,898 152,819 215,651 152,819 в 208,404 152,819 202,509 146,923 202,509 139,676 c ж 205.956 139.676 м 205.956 145.022 210.305 149.372 215.651 149.372 c 220.997 149.372 225.347 145.022 225.347 139.676 c 225.347 134.330 220.997 129.981 215.651 129.981 c 210,305 129,981 205,956 134,330 205,956 139,676 в час 205.651 139.676 м 205.651 134.162 210.137 129.676 215.651 129.676 в 221,165 129,676 225,652 134,162 225,652 139.676 с 225.652 145.191 221.165 149.677 215.651 149.677 c 210.137 149.677 205.651 145.191 205.651 139.676 в ж 209.186 139.676 м 209.186 143.241 212.086 146.142 215.651 146.142 c 219.216 146.142 222.117 143.241 222.117 139.676 c 222.117 136.111 219.216 133.211 215.651 133.211 в 212.086 133.211 209.186 136.111 209.186 139.676 c час 208,881 139,676 м 208,881 135,943 211,918 132,906 215,651 132,906 с 219,384 132,906 222,422 135,943 222,422 139,676 с 222,422 143,409 219,384 146,447 215,651 146,447 в 211.918 146.447 208,881 143,409 208,881 139,676 с ж 199,688 139,524 12,636 0,305 об. ж 218,729 139,524 12,885 0,305 об. ж 215,435 123,713 0,305 12,656 об. ж 220,682 148,680 м 220.682 148.970 221.157 148.865 220.823 148.918 c 220.489 148.970 220.193 149.408 л 220.058 149.445 220.198 149.208 в 220.339 148.970 220.682 148.390 220.682 148.680 c ж 222,908 144,615 м 222,371 144,862 222,662 144,615 в 222.803 144.492 222.468 144.088 г 222,521 143,507 л 222.996 143.261 222.855 143.454 в 222,715 143,648 222,706 143,454 222.759 143,841 c 222.811 144.228 222.908 144.615 л ж 216,758 152,885 м 216.996 152.833 216.952 152.938 216.952 153.176 c 216.952 153.413 217.049 153.220 217.489 153.510 c 217.928 153.800 217.823 153.660 218.069 153.704 c 218,316 153,747 218,307 153,756 218,500 153,756 в 218.694 153.756 218.650 153.994 218.650 154.381 c 218.650 154.680 218.404 154.187 218.210 154.047 c 218,017 153,906 217,920 153,756 217,533 153,704 с 217.146 153.651 217.198 153.660 217.005 153.704 c 216,811 153,747 216,327 153,369 г 216.371 153,079 л 216,521 152,938 216,758 152,885 в ж 224,781 142,618 м 224,784 142,607 224,786 142,595 224,791 142,583 в 224,816 142,521 224,805 142,552 224,781 142,618 в ж 221.650 147.088 м 221.940 146.841 221.747 147.088 221.940 146.797 c 222.134 146.507 222.231 146.261 г 222,521 146,164 л 223.102 145.777 л 223.102 145.830 223.295 145.442 в 223,489 145,055 223,638 144,959 223,682 144,765 в 223.726 144.572 223.726 144.132 г 223,823 143,797 л 224,307 143,507 л 224.650 142.970 л 224,737 142,737 224,781 142.618 v 224,731 142,843 225,072 142,989 224,888 143,357 в 224.694 143.745 224.404 144.035 г 224.351 144.132 224.307 144.422 в 224.263 144.712 224.113 144.862 г 223.630 145.442 л 223,586 145,249 223,392 145,830 в 223.199 146.410 223.242 146.560 223.049 146.701 c 222.855 146.841 222.662 147.281 г. 222,565 147,228 л 222,371 147,281 222,565 146,947 222,371 147,378 в 222.178 147.809 222.415 147.519 222.178 147.809 в 221.940 148.099 222.284 148.143 221.747 148.240 в 221.210 148.337 221.166 147.756 г 220.973 147.853 221,263 147,519 v 221,553 147,184 221,360 147,334 221,650 147,088 в ж 227,456 144,959 м 227.404 145.442 227.501 145.390 227.307 145.583 c 227.113 145.777 227.070 145.882 226.876 146.120 в 226.682 146.357 226.630 146.604 л 226.339 146.938 л 226.348 147.290 226.199 147.475 в 226.049 147.659 225.759 147.800 225.565 147.950 c 225.371 148.099 225.327 147.994 225.231 148.240 с 225.134 148.486 225.081 148.724 г 224.984 149.111 л 224,747 149,498 л 224,457 149,692 л 224.254 149.789 224.210 149.982 в 224.166150,176 223,586 150,712 л 223,445 150,704 223,489 150,950 в 223.533 151.196 223.436 151.293 г 222,908 151,337 л 222,178 151,047 л 221,888 150,994 221,597 151,047 в 221.307 151.099 221.307 150.712 г 221.404 150.475 221.597 150.228 в 221,791 149,982 221,844 149,938 221,940 149,551 в 222.037 149.164 222.134 148.777 г 221.940 148.337 222.231 148.337 в 222,521 148,337 222,424 148,337 222,618 148,337 в 222.811 148.337 223.199 148.293 г. 223.295 148.478 223.392 148.047 в 223,489 147,616 223,832 147,659 223.489 147,519 c 223.146 147.378 223.049 147.325 г 223,339 146,938 л 223,586 146,885 223,779 146,745 в 223.973 146.604 224.307 146.454 г 224.694 145.970 л 224.940 146.023 225.134 145.926 в 225.327 145.830 225.521 145.680 л 225.908 145.196 226.005 145.003 v 226.102 144.809 226.339 144.519 г 226,489 144,528 226,779 144,572 в 227.070 144.615 227.263 144.615 г 227,509 144,475 227,456 144,959 в ж 224,940 131,172 м 224.553 131.269 224.501 131.023 224.501 131.366 c 224,501 131,709 224,641 131,762 224,404 131.999 с 224.166 132.237 224.113 132.334 г 223,876 132,633 223,876 132,387 в 223.876 132.140 223.533 131.947 г 222.803 131.991 223.242 131.656 в 223,682 131,322 223,832 131,454 223,973 131,076 в 224.113 130.698 224.122 130.645 224.263 130.451 c 224.404 130.257 224.844 130.117 г 224.984 130.407 224.984 130.741 в 224.984 131.076 225.327 131.076 224.940 131.172 c ж 219,081 134,032 м 219.086 134.022 219.090 134.015 219.095 134.006 c 219.355 134.112 218.949 134.265 219.081 134.032 c ж 222,565 133,301 м 222.319 133,398 222,521 133,785 л 222,134 133,785 л 221,747 133,398 л 221.597 133.258 221.166 133.161 в 220.735 133.064 220.823 133.161 220.489 133.205 в 220.154 133.249 220.102 133.301 219.811 133.451 в 219.521 133.601 219.715 133.495 219.424 133.689 c 219.142 133.877 219.266 133.700 219.095 134.006 c 218.973 133.957 218.706 133.918 218.166 133.935 c 216,477 133,988 218,069 133,741 217,585 133,741 в 217.102 133.741 216.952 133.838 г 216.371 133.882 216.134 133.785 в 215,896 133,689 215,307 133,548 215.113 133,548 c 214.920 133.548 214.682 133.398 214.242 133.398 c 213.802 133.398 213.758 133.011 213.618 132.580 c 213,477 132,149 213,521 132,290 213,521 131,850 с 213,521 131,410 213,855 131,322 214,005 131,129 в 214.154 130.935 214.726 131.172 214.972 130.979 c 215.219 130.785 215.166 130.935 215.456 130.979 c 215.747 131.023 216.134 130.979 216.371 130.979 c 216.609 130.979 216.811 131.076 г 217.242 130.214 217.392 129.923 в 217,541 129,633 217,585 129,826 218,069 129,536 в 218,553 129,246 218.113 129,193 218,263 128,665 в 218.412 128.137 218.597 128.225 218.694 127.891 c 218,791 127,557 219,231 127,451 219,715 127,213 c 220.198 126.976 219.908 127.310 220.198 127.354 c 220,489 127,398 220,779 127,741 220,973 127,838 в 221.166 127.935 221.597 128.032 221.844 128.181 c 222.090 128.331 222.327 128.472 222.618 128.806 c 222.908 129.140 222.759 129.342 г 222,759 130,161 л 222.662 130.504 222.662 130.698 в 222.662 130.891 222.811 130.882 г. 222.662 131.269 222.468 131.366 в 222,275 131,463 222.231 131,753 г. 222.081 132.096 222.081 132.334 в 222.081 132.571 222.275 132.431 г 222,811 132,624 л 223.102 132.914 л 223.102 133.258 л 222.811 133.205 222.565 133.301 v ж 220,682 142,636 м 220.638 142.442 220.533 142.583 220.586 142.249 в 220.638 141.914 220.198 142.442 г 220.102 142.926 л 219,715 143,164 л 220.102 143.454 л 220.339 143.120 л 220.726 143.217 220.779 142.970 в 220,832 142,724 220,726 142,829 220,682 142,636 в час 220.005 136.205 м 219.961 136.011 219.811 136.064 г 219,371 136,205 219.178 136,354 в 218.984 136.504 219.521 136.689 г 219.811 136.733 220.005 136.689 в 220.198 136.645 220.049 136.398 220.005 136.205 в час 218,791 135,527 м 218.597 135.387 218.500 135.193 в 218.404 134.999 218.210 135.334 л 218.263 135.721 218.500 135.818 в 218,553 135,967 л 218.500 136.011 218.791 135.818 в 219.081 135.624 218.791 135.527 г час 224,984 141,862 м 224.650 141.571 л 224,210 141,184 л 223,876 141,237 л 223.779 141.193 223.779 141.431 v 223.779 141.668 223.823 141.818 г 223,647 142,073 223.462 141,985 в 223,278 141,897 222,424 141,237 222,380 142,592 в 222,354 143,384 221,958 142,733 221,676 142,917 в 221.395 143.102 221.395 143.199 221.017 143.480 c 220.638 143.762 220.876 143.674 220.788 144.000 с 220.700 144.325 220.225 144.747 л 219.662 143.956 219.380 143.859 в 219.099 143.762 219.380 143.621 219.424 143.252 c 219.468 142.882 219.187 142.873 г 218,483 142,970 218,342 142,733 в 218.201 142.495 217.779 142.214 л 217.604 142.314 217.189 142.561 в 215,839 143,364 218,479 142,731 216.099 142,873 c 215.675 142.899 215.511 142.515 л 215.791 141.914 л 216,275 141,571 216,468 141,475 в 216.662 141.378 217.049 140.991 г 217.102 140.894 217.242 140.604 в 217.383 140.313 217.198 140.313 217.242 140.076 c 217.286 139.838 217.198 139.495 217.533 139.442 c 217,867 139,390 217,533 139,205 217,533 139,011 c 217,533 138,818 217,533 138,475 г 217,533 138,140 217,489 137,850 в 217,445 137,560 217,242 137,894 216,855 137,894 в 216,468 137,894 216,618 137,797 216,521 137,604 c 216,424 137,410 216.424 137,313 216,231 136,926 в 216.037 136.539 215.887 136.785 215.694 136.592 c 215.500 136.398 215.307 136.689 215.016 136.733 c 214.726 136.777 214.585 136.829 214.049 137.173 c 213.512 137.516 213.714 137.700 л 213.908 137.700 214.242 137.700 в 214,577 137,700 214,489 137,947 214,779 138,044 в 215.069 138.140 214.972 138.431 215.166 138.571 в 215,360 138,712 215,263 138,914 215,307 139,108 в 215.351 139.302 215.069 139.442 г 214.436 139.302 л 214.339 139.011 л 214,242 138,818 214,198 138,475 в 214.154 138.131 214.049 138.281 г 213,565 137,947 л 213,468 137,894 213,274 137,850 в 213.081 137.806 213.134 138.044 г 212.984 138.378 л 213,178 138,624 л 213,468 138,668 л 213,521 138,914 213,908 139,108 в 214.295 139.302 213.758 139.205 213.468 139.152 c 213.178 139.099 213.274 139.011 г 212.747 139.011 212.500 139.011 в 212.254 139.011 212.307 139.205 г 212.016 139.636 л 212,553 140,173 л 212.597 140.217 213.081 139.926 в 213.266 139.815 213.337 139.747 213.355 139.705 c 213,565 139,882 л 213,468 140.410 л 213,811 140,560 л 213,811 141,044 л 214.198 141.334 л 214.489 141.571 214.682 141.571 в 214.876 141.571 215.069 141.571 г 215.753 142.731 л 216,043 143,052 л 214.920 142.873 л 214,156 142,797 213,971 142,515 в 213.786 142.234 213.327 142.126 л 212,852 142,592 л 212.808 142.310 212.764 142.126 в 212.720 141.941 212.201 142.073 212.008 142.073 с 211,814 142,073 212,204 142,500 212,019 142,500 с 211.834 142.500 211.287 142.744 л 210.638 142.773 210.586 142.958 в 210.492 143.285 210.134 143.155 л 209.808 142,548 209,667 142,214 в 209,527 141,879 209,386 141,985 209,192 141,844 в 208.999 141.703 208.629 141.703 л 208.400 141.369 208.163 141.088 в 207.925 140.806 208.022 140.577 207.881 140.340 в 207.741 140.102 207.697 140.014 207.459 139.961 c 207.222 139.909 207.134 139.029 г 207,424 138,818 л 207.662 139.249 л 208.101 139.592 л 208.339 140.410 л 208.295 140.841 208.489 140.797 в 208.682 140.753 209.069 140.656 г 209.113 140.173 209.113 139.979 в 209.113 139.785 209.263 139.548 209.263 139.302 c 209.263 139.026 209.236 138.962 г 209,076 138,927 208,786 138,733 в 208.456 138.513 208.339 138.184 л 208.145 137.463 208.242 137.656 в 208.339 137.850 208.532 138.088 г 208,726 138,624 208,920 138,624 в 209.113 138.624 209.360 138.958 209.263 138.571 c 209.166 138.184 209.210 137.947 г 209,447 137,753 209,500 137,947 в 209.553 138.140 209.597 138.431 г 210.125 138.475 210.371 138.378 в 210.618 138.281 210.908 138.422 210.908 138.088 с 210,908 137,753 211,137 137,516 211,383 137,560 в 211,559 137,604 211.348 138,000 211,682 137,850 в 212.016 137.700 211.964 137.850 211.920 137.560 c 211.876 137.269 211.920 137.120 л 212.166 137.023 л 212.263 137.604 л 212,553 137,850 л 212,747 137,560 л 212.747 137.120 л 213,327 137,129 213,521 137,076 в 213.714 137.023 214.005 136.733 г 214,682 136,539 л 214.964 136.398 215.210 136.302 v 215.456 136.205 215.553 135.967 г 215,843 136,205 л 215,887 135,580 л 215.650 135.237 л 215,835 135,237 215,791 135,044 в 215.747 134.850 215.940 134.612 215.553 134.709 c 215.166 134.806 215.113 134.753 л 214.972 134.129 л 215,404 134,032 л 215.500 134.278 215.694 134.322 в 215.887 134.366 216.134 134.560 г 216,125 134,753 216,371 134,753 в 216.618 134.753 216.952 134.753 г 217.093 134.797 217.242 134.560 в 217.309 134.453 217.345 134.366 217.366 134.301 c 217.242 134.903 л 217.392 135.290 217.489 135.096 в 217.585 134.903 217.779 134.612 л 217.735 134.709 217.973 134.709 в 218.210 134.709 218.597 134.709 г 218,316 134,894 218,747 134,947 в 219,178 134,999 219,283 135,237 219.231 134,850 c 219.192 134.569 219.209 134.392 219.222 134.315 c 219.303 134.302 219.439 134.275 219.662 134.225 c 220.533 134.032 220.779 133.882 г 221.069 133.794 221.263 133.741 в 221.456 133.689 221.650 133.935 г 221.791 133.829 221.694 134.463 в 221.597 135.096 221.984 135.096 г 221,844 135,774 л 221.501 135.334 л 220.823 134.999 л 220.823 135.290 220.682 135.677 г 221.017 135.967 л 221.307 136.064 л 221,888 136,398 л 222.081 137.076 л 222,521 137,313 л 223.049 137.357 223.339 137.313 v 223,630 137.269 ​​224.210 137.173 л 223.973 137.991 л 223,436 138,431 л 223,295 138,818 л 223,339 140,023 223,339 140,217 в 223.339 140.410 223.533 140.947 г 223,823 140,753 224,017 140,753 в 224,210 140,753 224,360 140,648 224,553 140,894 в 224.747 141.140 224.888 141.281 л 225,371 141,765 л 225,275 142,196 л 224.984 141.862 л ж 219,231 134,269 м 219.227 134.285 219.222 134.315 в 218.987 134.352 219.231 134.269 г ж 217,366 134,301 м 217,392 134,172 л 217.391 134.220 217.366 134.301 в ж 210,028 131,823 м 209,509 132.070 209,500 132,343 209,263 132,589 c 209.025 132.835 209.060 133.266 г 208.779 133.108 208.620 133.152 в 208,462 133,196 208,497 133,434 208,339 133,750 в 208.181 134.067 208.216 134.313 208.216 134.674 c 208.216 135.035 208.216 135.237 208.057 135.642 c 207,899 136,047 207,934 136,082 207,776 136,645 в 207.617 137.208 207.653 137.252 г 207.213 137.771 206.931 137.771 в 206.650 137.771 206.368 138.052 г 206.122 138.299 205.964 138.334 в 205.805 138.369 205.814 137.947 205.576 137.912 в 205,409 137.885 205.066 137.208 г 204,811 136,979 204,846 136,671 в 204,881 136,363 204,934 136,108 204,873 135,827 в 204,811 135,545 204,424 135,431 203,852 135,457 в 203.280 135.483 203.183 135.598 203.007 135.712 c 202,831 135,827 202,788 135,994 202,585 135,994 в 202.383 135.994 202.392 135.571 г 201.793 135.686 л 201,573 135,941 л 201.433 135.598 л 201.301 135.281 л 201.301 134.560 л 201.380 133.909 201.459 133.750 в 201.538 133.592 201.697 133.627 г 201,503 134,111 л 202.022 134.190 л 202,585 134,032 202.946 133,794 v 203,307 133,557 203,227 133,592 203,474 133,469 c 203,720 133,346 203,914 133,187 204,072 132,950 с 204,230 132,712 204,881 132,307 205,075 132,184 с 205.268 132.061 205.444 132.026 205.682 131.656 c 205.920 131.287 206.166 130.856 г 206,852 130,777 207,011 130,856 в 207.169 130.935 207.169 131.093 207.371 130.935 c 207,574 130,777 207,574 131,014 207,855 130,979 в 208.137 130.944 208.057 130.979 208.339 131.014 c 208.620 131.049 208.779 131.058 209.342 131.137 c 209,905 131,216 210.063 131,181 г 210.547 131.577 210.028 131.823 в ж 214,429 142,449 м 214,657 143,105 л 214.978 143.517 215.023 143.517 в 215.069 143.517 215.435 143.578 г 215,511 143,471 л 215.450 143.349 215.374 143.303 в 215.298 143.257 215.283 143.257 215.191 143.242 c 215.100 143.227 215.069 143.257 215.008 143.212 в 214.947 143.166 214.932 143.059 214.901 143.013 c 214,871 142,968 214,779 142,830 214,764 142,739 в ж 216,518 143,049 м 216,579 143,064 216,823 143,186 216,869 143,202 в 216,914 143,217 217,128 143.171 год 217,463 143,217 л 217,509 143,110 л 217,341 142,973 л 217.235 142.988 217.174 143.003 в 217.113 143.019 216.869 143.003 г. 216,731 142,881 л 216,579 142,805 л 216,518 143,049 л ж 218,531 151,772 м 218,561 151,635 л 218,699 151,467 л 218.775 151.559 218.744 151.604 в 218.714 151.650 218.531 151.772 г ж 218,485 151,299 м 218.500 151.254 218.577 151.101 г 218.577 151.177 218.592 151.223 в 218.607 151.269 218.546 151.330 л 218,485 151,299 л ж 218,195 151,742 м 218.058 151.894 218.073 151.787 в 218.089 151.681 218.211 151.528 л 218,394 151,665 л 218.195 151.742 л ж 0,000 0,000 0,000 0,000 к / GS3 GS 190.059 113.724 51.024 -8.504 пере е * BT 6 0 0 6 190,2364 108,2928 тм 0,000 0,000 0,000 1.000 к 0,0000 Тс (\ 012 \ 015) Tj ET 0,000 0,000 0,000 0,000 к 252,421 608,370 45,355 -8,504 об. 240,905 108,293 м е * BT 6 0 0 6 262,2634 602,9384 тм 0,000 0,000 0,000 1.000 к 0,0001 Тс (\ 015) Tj / F4 1 Тс 60 0 0 60 79,5076 527,3655 тм / Cs7 CS 1.000 SCN -0,0222 Тс () Tj 1,8189 -1 ТД -0,0224 Тс () Tj Т * -0,0221 Тс (\ 012) Tj / F2 1 Тс 10 0 0 10 192.8934 366,019 тм 0,000 0,000 0,000 1.000 к 0,0000 Тс () Tj 0 -1,3 TD () Tj Т * (\ 012) Tj Т * 0,0001 Тс (! \ 012) Tj 0 -1,8669 TD [(«# $% & ‘) — 277,7 (\ (\) * &’ ‘+)] TJ / F4 1 Тс 0 -3,0008 TD 0,0000 Тс (\ 015) Tj 0 -1,8669 TD (\ 015) Tj 0 -1,3 TD -0,0056 Тс (\ 012 \ 015 \ 012) Tj 0 -1,8669 TD -0,0001 Тс () Tj Т * 0,0000 Тс (! «) Tj 0 -1,3 TD (\ 015 «\ 015) Tj / F2 1 Тс 0 -11,7174 ТД 0,0001 Тс [(,) — 277,7 (-./»& » 0)] TJ ET конечный поток эндобдж 4 0 obj > / XObject> / ExtGState> / ColorSpace> >> эндобдж 5 0 obj > эндобдж 6 0 obj > эндобдж 7 0 объект > >> поток №96 & Aɰ`967M @ rlB-

Возможно больше, чем вы хотели знать об яде гремучей змеи: назначение, химический состав и воздействие на организм

В анонимном письме на номер «Пенсильванский журнал » в декабре 1775 года описывается, как писатель заметил изображение гремучей змеи, изображенное на барабане, принадлежащем морскому пехотинцу, со словами «Не наступай на меня», написанными под изображением змеи.Автор продолжал теоретизировать, почему этот символ был выбран морским пехотинцем и его предполагаемое значение. Автор начал с описания характеристик, которые отличают гремучих змей от других животных, и предположил, почему эти же свойства могут быть надлежащим образом использованы для обозначения Соединенных Штатов Америки:

«Я вспомнил, что ее глаза превосходны по яркости, как у любого другого животного, и что у нее нет век. Поэтому ее можно считать символом бдительности. Она никогда не начинает нападать и, будучи однажды вовлеченной, никогда не сдается: поэтому она является символом великодушия и истинного мужества.Словно стремясь предотвратить любые притязания на ссору с ней, оружие, которым природа отполировала ее, она прячет в своем небе, так что тем, кто с ней не знаком, она кажется самым беззащитным животным. ; и даже когда это оружие показано и протягивается для ее защиты, оно кажется слабым и презренным; но их раны, какими бы маленькими они ни были, решительны и смертельны. Сознавая это, она никогда не ранит, «пока она щедро не предупредит даже своего врага и не предупредит его об опасности наступить на нее».

— Американский отгадыватель »

Хотя вышеупомянутый абзац был написан анонимно, историки считают, что автором был Бенджамин Франклин. Полное письмо можно просмотреть по адресу http://greatseal.com/symbols/rattlesnake.html.

В этом коротком блоге будут рассмотрены свойства яда гремучих змей.

Для чего нужен яд гремучей змеи?

Есть две основные категории ядов: те, которые предназначены для подавления добычи, и те, которые предназначены для отговора хищников.Гремучие змеи развили свой яд, чтобы подчинить себе добычу и начать процесс пищеварения. На рис. 1 показана деревянная гремучая змея ( Crotalus horridus ), которая поедает восточную серую белку ( Sciurus carolinensis ) после того, как покорил ее ядом. У них есть специальный набор белков и ферментов, которые помогают выполнить эту задачу. К сожалению, хотя яд гремучих змей был разработан для использования в добыче пищи, а не в качестве защитной меры, защитный укус, тем не менее, приводит к тому, что эти пищеварительные соединения разрывают ткани тела и вызывают боль, отек и некроз.

Рисунок 1 . Эта деревянная гремучая змея ( Crotalus horridus ) была сфотографирована автором, когда она поедала восточную серую белку ( Sciurus carolinensis ) в округе Алачуа, Флорида, после того, как подавила ее ядом. Эта змея относится к популяции с более высокой концентрацией нейротоксического яда, чем у популяций к северу от Interstate 10.

Фотография и авторские права защищены автором Джейсоном Зейтцем

Из чего состоит яд гремучей змеи?

Яд гремучих змей представляет собой смесь гемотоксинов и нейротоксинов, но в основном это гемотоксины.Гемотоксины поражают ткани и кровь, вызывая кровотечение и некроз. Их яд на самом деле представляет собой коктейль из химических элементов. Нейротоксины поражают нервную систему, некоторые из которых могут вызвать паралич. Хотя каждый вид ядовитой змеи имеет свой собственный коктейль белков и ферментов по сравнению с другими видами, есть некоторые свидетельства того, что относительная концентрация нейротоксинов по отношению к гемотоксинам может варьироваться в зависимости от региона даже в пределах данного вида змей. Например, некоторые исследователи считают, что значительный процент деревянных гремучих змей к югу от межштатной автомагистрали 10 (I-10) во Флориде имеет более высокую концентрацию нейротоксического яда, чем древесные гремучие змеи к северу от этого коридора.Различные белки и ферменты в яде гремучей змеи обладают синергетическим эффектом, который в результате приводит к полному сердечно-сосудистому коллапсу предполагаемой жертвы змеи. Когда гремучая змея кусается в целях защиты, эффекты смягчаются из-за большого размера человека по сравнению с его добычей (обычно грызуном).

Некоторые недавние работы ученых показали, что некоторые формы гемотоксических ядов не являются иммуногенными, что означает, что они не вызывают иммунный ответ жертвы. Они проскальзывают иммунной системой зараженного животного, поэтому не вырабатываются антитела для борьбы с токсинами.Это вызывает беспокойство, поскольку противоядия производятся путем введения яда крупному животному, обычно лошади, и последующему сбору антител, созданных лошадью, которые впоследствии могут быть использованы для лечения жертв укусов.

Гемотоксиновые яды, такие как яд гремучих змей, начинают разрушать структурные компоненты кровеносных сосудов и тканей, как только они вводятся инъекцией. Это осуществляется металлопротеазами, которые являются протеазами-ферментами, которые используют металл в качестве катализатора гидролиза пептидных связей.Поскольку эти ферменты расщепляют даже белки, отвечающие за поддержание целостности клеточных стенок кровеносных сосудов, возникает локальное кровотечение, посылая кровь в окружающие ткани. Те же металлопротеиназы также разрушают скелетные мышцы. Другой компонент токсина гремучих животных, фосфолипазы, вызывают гибель мышечной ткани, атакуя их клеточные мембраны. Некоторые из этих фосфолипаз содержат ферменты, которые создают отверстия в стенках мышечных клеток, расщепляя фосфолипиды, удерживающие мембраны вместе.Другие фосфолипазы используют пока неустановленные средства разрушения мышечных клеток.

Есть еще другие ферменты, содержащиеся в яде гремучей птицы, вызывающие разрушение. К ним относятся гиалуронидазы и сериновые протеазы, каждая из которых имеет свой деструктивный механизм. Некоторые химические соединения из яда распространяются далеко от места укуса и наносят ущерб кровеносным сосудам и скелетным мышцам в других частях тела.

В дополнение к разрушительному действию самих компонентов яда, некоторые белки обманывают нашу иммунную систему, чтобы она боролась с нашими собственными клетками.В частности, действие металлопротеаз и фосфолипаз запускает иммунный ответ на участке раны. Иммунные клетки, такие как лейкоциты, сигнализируют об усилении иммунного ответа, высвобождая мессенджеров, таких как интерлейкин-6. Поскольку компоненты яда не являются связующей силой и не содержат бактерий, которые можно атаковать, иммунная система вместо этого запускает атаку, которая усугубляет разрушение наших собственных тканей. Ущерб, наносимый нашей собственной иммунной системой, вызывает двойное беспокойство, учитывая, что противоядие не помогает смягчить его последствия.Исследования показали, что когда иммунная система отключена, некротические эффекты змеиного яда значительно уменьшаются. Например, использование Бенадрила может уменьшить отек и отек, связанные с отравлением.

Записка о консервации

Хотя змей часто опасаются и преследуют на большей части их ареалов в Соединенных Штатах и ​​других местах, они, тем не менее, занимают ценное место в экологии многих экосистем. В U. обитают сотни видов змей.S., но лишь небольшая часть из них ядовита. Например, во Флориде насчитывается 50 видов змей, но только 6 (12%) из них ядовиты. Ядовитых змей можно безопасно и эффективно избежать, если руководствоваться здравым смыслом. Если змея считается ядовитой или неизвестно, является ли она ядовитой, самое безопасное решение — оставить ее в покое. Помните, что большинство жертв укусов укушены, потому что они пытаются схватить змею или убить ее.

Змеи выполняют ценные услуги, такие как борьба с грызунами и другими вредителями.Недавнее исследование показало, что древесные гремучие змеи могут снизить заболеваемость болезнью Лайма на северо-востоке США, охотясь на хозяина (грызунов), являющегося переносчиком клеща, распространяющего болезнь. По оценкам, от 2500 до 4500 клещей ежегодно удалялись из исследуемых районов на северо-востоке США из-за того, что древесные гремучие змеи поедали своих млекопитающих-хозяев.

Недавние исследования показывают, что гремучие змеи могут способствовать рассеянию семян трав и других растений. Грызуны едят семена трав и других растений, но обычно эти семена не выживают в процессе пищеварения грызунов.Однако грызуны часто носят семена в защечных мешочках, и если грызуна затем убьет и съест гремучая змея, эти семена смогут пройти через пищеварительный тракт змеи и остаться жизнеспособными. Было обнаружено, что три вида гремучих змей, обитающих в пустыне, поедали грызунов с семенами в щечных мешочках, и что семена способны прорастать в толстой кишке змеи и могут передаваться с фекалиями змеи, что способствует распространению побегов растений.

Популяции гремучих змей и многих других видов змей сокращаются в Соединенных Штатах из-за потери среды обитания, продолжающихся преследований и новых болезней, таких как змеиный гриб Ophidiomyces ophiodiicola .Восточная гремучая змея ромбовидная ( Crotalus adamanteus ) (рис. 2) сократилась до такой степени, что этот вид был подан прошение о защите как находящийся под угрозой исчезновения в соответствии с Законом об исчезающих видах.

Рисунок 2 . Восточная гремучая змея ромбовидная ( Crotalus adamanteus ) — один из наиболее известных (и часто преследуемых) видов гремучих змей.
Фотография и права защищены автором, Джейсоном Зейтцем

Интересный способ сообщить о своих наблюдениях за земноводными и рептилиями с помощью Citizen Science

Используйте приложение для мобильного телефона HerpMapper, чтобы записывать и отправлять данные о наблюдениях за амфибиями и рептилиями! Это весело, просто и легко.Посетите веб-сайт https://www.herpmapper.org/ для получения дополнительной информации и загрузки приложения.

Источники

Адкинс, К.Л., Д.Н. Гринвальд, Д. Средство, Б. Маттурро и Дж. Райс. 2011. Петиция о включении восточной алмазной гремучей змеи ( Crotalus adamanteus ) в список находящихся под угрозой в соответствии с Законом об исчезающих видах. Петиция подана 11.08.11 в Службу охраны рыбных ресурсов и диких животных США (USFWS), Вашингтон, округ Колумбия, и USFWS, регион 4, Атланта, Джорджия.

Браун, W.S. 1993. Биология, статус и управление лесной гремучей змеей ( Crotalus horridus ): Руководство по сохранению . Общество изучения земноводных и рептилий, Герпетологический циркуляр № 22, Университет Канзаса, Лоуренс, Канзас.

Кабай, Э., Н. М. Карузо, К. Р. Губы. 2013. Деревянные гремучие змеи могут снизить заболеваемость болезнью Лайма на северо-востоке США . 98 ^-е Ежегодное собрание Экологического общества Америки, 08.06.13, Миннеаполис, Миннесота.Доступно онлайн 02/05/18 по адресу https://eco.confex.com/eco/2013/webprogram/Paper44305.html.

Лорч, Дж. М., С. Ноулз, Дж. Ланктон, К. Мичелл, Дж. Л. Эдвардс, Дж. М. Капфер, Р.А. Staffen, E.R. Wild, K.Z. Шмидт, А.Е.Баллманн, Д. Блоджетт, Т. Фаррел, Б. Глориозо, Л.А. Ласт, С.Дж. Прайс, К. Шулер, С.Е. Смит, Дж. Ф. Х. Веллехан младший и Д.С. Блехерт. 2016. Змеиное грибковое заболевание: новая угроза для диких змей. Философские труды Королевского общества B 371: 20150457.Доступно онлайн 13.02.18 по адресу http://rstb.royalsocietypublishing.org/content/royptb/371/1709/20150457.full.pdf.

Reiserer, R.S., G.W. Schuett, H.W. Грин. 2018. Проглатывание семян и прорастание гремучих змей: недооцененные агенты спасения и вторичного распространения. Труды Королевского общества B : 285: 20172755. http://dx.doi.org/10.1098/rspb.2017.2755.

Робертсон, М. 2017. чел. комм. относительно региональных различий в нейротоксинах у древесной гремучей змеи.

Wilcox, C. 2016. Ядовитый, как самые смертоносные существа Земли освоили биохимию . Scientific American / Фаррар, Страус и Жиру, Нью-Йорк, штат Нью-Йорк.

Двухступенчатый механизм инактивации функции центра организации микротрубочек на центросоме

[Примечание редакции: ответы автора на первый раунд рецензирования приводятся ниже.]

Рецензент № 1:

[…] Тема и интересная, и важная; разборка центросом, или дематурация, нигде не привлекает внимания, которое требует созревание центросом.Очевидно, что дематурация — это активный процесс, а не просто пассивное разрушение PCM. Это исследование, однако, не дает нового понимания разборки. Я подробно об этом рассказываю ниже.

1) Фрагментация центросом. Я был удивлен, что не было упоминания об исследовании, проведенном в лаборатории Уодсворта в 2005 году (Rusen and Wadsworth, 2005). Лаборатория Уодсворта продемонстрировала тот же феномен разборки центросомы на пакеты или фрагменты и их способность образовывать ядра микротрубочек.В то время как предыдущее исследование проводилось в другой системе, наблюдение за пакетами само по себе не является чем-то особенным. Еще один пример, который авторы упомянули, — вспышки эмбрионов дрозофилы. Здесь авторы правильно ссылаются на работу Megraw, но они неправильно заявляют, что вспышки присутствуют на протяжении всего клеточного цикла. Вспышки образуются специально во время выхода из митоза, и они также выпускают пакеты в цитоплазму. Это было показано в Lerit et al. 2015.

Мы благодарим рецензента за эту рекомендацию и теперь цитируем статью Уодсворта в нескольких местах.Мы также добавили параграф в наше Обсуждение, где мы сравниваем и противопоставляем пакеты, блики и фрагменты центросом. У этих структур есть некоторые интересные сходства, но они также имеют некоторые отличия, которые мы сейчас подчеркиваем. Что касается времени вспышек, Megraw et al., 2002 заявили, что «количество вспышек, связанных с центросомами, зависит от клеточного цикла. […] Интенсивность вспышек наиболее высока при расщеплении телофазных / интерфазных центросом и наименьшая в митотических центросомах, особенно во время метафазы и анафазы.Кроме того, Cnn, по-видимому, более тесно связан с метафазными / анафазными центросомами, придавая центросомам более округлый вид, с меньшим количеством проекций, которые порождают блики, наблюдаемые на центросомах на др. Фазах цикла дробления… ». Количественная оценка, представленная в этой статье, показывает, что вспышки присутствуют в течение всего периода клеточного цикла, хотя количество и интенсивность вспышек уменьшается в метафазе. Кроме того, недавнее исследование Lerit et al., 2015 показало, что вспышки присутствуют и активны на протяжении всей интерфазы.Мы изменили наше утверждение относительно вспышек, подчеркнув тот факт, что пакеты обнаруживаются исключительно во время разборки, в то время как вспышки в основном обнаруживаются во время межфазной и телофазной фаз.

2) Механизм разборки центросомы. Хотя авторы лучше описывают эффекты уменьшения сил вытягивания микротрубочек (через потерю Grp-1/2), ингибирования функции PP2A (лекарственное лечение) и потери Let-92 при разборке центросомы, все эти эксперименты ранее были описаны в Enos. и другие., 2018. Это предыдущее исследование значительно снижает энтузиазм по поводу текущих результатов. Я думаю, что продвижение в этой области потребует определения целей PP2A.

Мы полностью согласны с рецензентом в том, что мы подтверждаем результаты, опубликованные Enos et al., 2017, когда наши эксперименты были в стадии реализации. Однако, хотя некоторые из механистических аспектов между двумя статьями кажутся схожими на поверхности, наша рукопись имеет несколько важных отличий, которые, как нам кажется, делают ее более полной историей инактивации центросом, которая по-прежнему понравится широкой аудитории:

a) Enos et al.полностью сосредоточен на SPD-5, в то время как наша рукопись анализирует более полный репертуар белков PCM и обнаруживает, что удалению SPD-5 ​​предшествует удаление нескольких исключительно внутренних сферических белков, включая SPD-2 и компонент γ-TuRC MZT-1. Наши данные не только рисуют более полную картину инактивации центросом, но также определяют конкретные регулируемые этапы процесса разборки,

b) Посмотрев на несколько компонентов PCM, наше исследование идентифицирует новые белковые территории в пределах C.elegans PCM. То, что известные партнеры связывания, по-видимому, локализуются в разных регионах ПКМ, меняет наши представления о природе сборки и функции ПКМ,

c) Мы идентифицируем важные поведенческие различия в способах удаления белков PCM из центросомы. С помощью этого анализа мы обнаружили фазу постепенного растворения, которая предшествует формированию меньших суб-PCM «пакетов», которые сохраняют потенциал MTOC. Как отмечает Enos et al. только охарактеризовал SPD-5 ​​и не комментировал его поведение при разборке, эти способы разборки, которые мы находим, совершенно новы и указывают на различные регуляторные механизмы.

d) Хотя Enos et al. обнаружив роль активности фосфатазы и корковых сил в разборке SPD-5, мы снова выясняем более полную картину того, как эти механизмы влияют на общую разборку PCM. Мы обнаружили, что инактивация центросом инициируется поведением растворения, которое, по-видимому, контролируется активностью фосфатазы. Этот процесс потенциально ослабляет ПКМ, который затем полностью очищается корковыми силами. В то время как SPD-5 ​​зависит от корковых сил для его полного удаления, мы обнаружили, что SPD-2 может быть удален в отсутствие корковых сил и вместо этого полагается на активность фосфатазы для надлежащего выведения.

e) Мы определяем функциональное значение для своевременного удаления белков PCM; как последующее разделение центриолей, так и накопление следующего раунда PCM влияет, когда SPD-5 ​​не очищается должным образом от PCM,

f) В нашем исследовании для анализа используются только эндогенно меченые белки, а не сверхэкспрессированные трансгены, что позволяет более уверенно описывать эндогенное поведение и механизмы.

Эти пункты добавлены в Обсуждение. Мы также добавили дополнительные эксперименты, которые еще больше отличают нашу статью от работы Еноса.et al., 2017 и расширить наше понимание разборки PCM.

1) Новые исследования локализации выявили дополнительные аспекты организации и поведения ПКМ: мы визуализировали эндогенно меченые PLK-1, TAC-1, ZYG-9, LET-92, AIR-1 и TPXL-1, измерив их распределение в ПКМ. (Рисунок 1 и Рисунок 1 — дополнение к рисунку 1), а также наблюдение за их поведением при разборке (Рисунок 1 и Рисунок 1 — приложение к рисунку 2). Мы обнаружили, что эти белки также занимают отдельные области во внутренней и внешней сфере PCM, в частности, при этом локализация TAC-1 и связывающего партнера ZYG-9 различима во внешней сфере, AIR-1 и TPXL-1 занимают почти исключительно внешнюю сферу. кольцевая локализация, а AIR-1 и PLK-1 (две митотические киназы) принимают дополнительные паттерны локализации в PCM.PLK-1 и TAC-1 были разобраны путем растворения, в то время как ZYG-9, AIR-1, TPXL-1 и, возможно, LET92 разорвались и образовали пакеты. Интересно, что AIR-1 и TPXL-1, по-видимому, разрываются и распространяются по микротрубочкам за несколько минут до разрыва SPD-5 ​​и GIP-1, предполагая, что их реорганизация может играть ключевую роль в реорганизации сети микротрубочек, приводящей к разрыву оставшихся белков PCM.

2) Новые исследования ингибиторов показывают время активности фосфатазы, роль фосфатаз в формировании сборки PCM и разъединение регуляции SPD-2 и SPD-5:

Мы хотели проверить модель, согласно которой активность фосфатазы присутствует в центросоме на протяжении всего митоза и что разборка является результатом продолжающейся активности фосфатазы, связанной со снижением активности киназы (Рисунок 6).Мы протестировали эту модель, наблюдая за локализацией LET-92, которая, как мы обнаружили, связана с центросомой во время сборки и разборки. Мы дополнительно протестировали эту модель, обрабатывая эмбрионы в разное время митоза ингибитором CDK флавопиридолом (FP) и ингибитором фосфатазы широкого спектра действия окадаевой кислотой (OA). Наши предыдущие исследования показали, что лечение FP может вызвать преждевременную разборку g-тубулина. Мы повторили этот эксперимент на эмбрионах, экспрессирующих tagRFP :: SPD-5; SPD-2 :: GFP и обнаружили, что оба этих белка также были преждевременно разобраны путем растворения в присутствии FP.Примечательно, что эта преждевременная разборка может ингибироваться в присутствии как FP, так и OA, указывая тем самым, что активность CDK в сборке PCM обычно противостоит активности фосфатазы. Интересно, что лечение ОА само по себе стабилизировало ассоциацию SPD-5 ​​с центросомой, но также вызывало преждевременное удаление SPD-2 в NEBD. Этот эксперимент не только предполагает, что чувствительная к ОА фосфатаза контролирует поддержание SPD-2 в центросоме, но также дополнительно разъединяет регуляцию и центросомную ассоциацию SPD-2 и SPD-5: SPD-2 покидает центросому, не влияя на способность SPD- 5, чтобы остаться связанным.

3) Новые эксперименты по слиянию клеток показывают, что природа PCM изменяется на протяжении митоза: разборка PCM может быть просто точным преобразованием сборки, т.е. киназы катализируют добавление PCM, а фосфатазы катализируют их вычитание. Однако мы обнаружили роль корковых сил в разборке внешней сферы, предполагая, что фосфатаз недостаточен для удаления всего PCM из центросомы, особенно во время фазы разборки. Эти данные, а также недавние данные in vitro поддерживают модель, в которой природа PCM изменяется на протяжении митоза, так что сборка и разборка PCM различны.Чтобы проверить эту модель, мы слили клетку с разбирающейся центросомой (ABp) с клеткой с собирающейся центросомой (P ₁ ), чтобы определить, влияют ли цитоплазматические факторы, способствующие одному состоянию, на другое (Рисунок 6). Мы обнаружили, что сборка и разборка PCM являются взаимно устойчивыми процессами, при которых дизассемблирующая центросома продолжала разбираться, а собирающаяся центросома продолжала сборку после слияния клеток. Эти результаты показывают, что разборка PCM устойчива к добавлению нового PCM митотической киназой и что сборка PCM устойчива к разборке путем разборки компетентной цитоплазмы.Любопытно, что как только старый PCM был удален из разобранной центросомы, новый PCM был добавлен преждевременно в соответствии с притоком митотических киназ при слиянии клеток. Эти исследования предоставляют доказательства in vivo изменения природы PCM на протяжении митоза.

Вместе эти дополнительные исследования подтверждают, что сборка PCM регулируется как киназами, так и фосфатазами, которые, возможно, создают более подвижное, жидкое состояние PCM (Figure 7). Со временем киназы естественным образом инактивируются в клеточном цикле, позволяя активности фосфатазы доминировать и удалять субнабор PCM внутренней сферы.Однако природа ПКМ также изменяется, так что внешняя сфера ПКМ становится устойчивой к удалению путем фосфорегуляции, что требует механического разрушения кортикальными тянущими силами для эффективного удаления.

3) Распределение белков центросом. Одним из захватывающих результатов было открытие, что Spd-5 и Spd-2 не занимают одно и то же место в центросоме. Это может иметь важные последствия для нашего взгляда на PCM C. elegans, которые могут отличаться от текущих моделей. Однако выбор изображения меня удивил.Использование микроскопии со структурированным освещением для определения областей, занимаемых центросомным белком, является стандартной практикой в ​​области центросом. Исследование локализации с использованием SIM было бы более подходящим не просто потому, что это стандартная практика, а скорее потому, что визуализация SIM сыграла решающую роль в формировании текущих моделей и гипотез относительно функции центросом.

Мы согласны с тем, что SIM-микроскопия и другие методы сверхвысокого разрешения были инструментами и стандартом для характеристики организации белков PCM.На сегодняшний день эти исследования сосредоточены на характеристике организации ПКМ в клеточных линиях, фиксированных образцах или изолированных центросомах (Fu et al., 2012, Lawo et al., 2012, Sonnen et al., 2012, Mennella et al., 2012) . Здесь мы стремились понять организацию PCM в живом организме, наблюдая за эндогенно мечеными белками. Из-за природы образца мы не могли использовать SIM-микроскопию или другие методы сверхвысокого разрешения. Однако белки C. elegans PCM показали резкую разницу в организации и поведении, так что мы все еще могли наблюдать с помощью традиционной конфокальной микроскопии с вращающимся диском.Мы согласны с тем, что наши выводы ограничены нашим выбором метода визуализации, и добавили заявление об этом в Обсуждение (второй абзац).

Рецензент № 2:

[…] Это информативное исследование, которое добавляет механистическое понимание важного процесса инактивации центросом через PP2A и кортикальные тянущие силы. Однако большая часть этой работы, по-видимому, в значительной степени поддерживает выводы Enos et al., 2018, опубликованные в Biology Open. Тем не менее, настоящая работа выявляет некоторые различия в отношении временных требований фосфатаз по сравнению с силами.Далее авторы описывают нарушение разделения центриолей в ответ на нарушение процесса разборки PCM, тем самым добавляя физиологическое значение. Однако не очевидно, что настоящее исследование представляет собой достаточный прогресс, чтобы его можно было опубликовать в eLife.

1) Не могли бы авторы описать более подробно, что они измеряют для количественной оценки интенсивности центросом? Имеет ли ROI определенную форму / размер? Включают ли авторы белки, которые разорвались и мигрировали от центриоли? Как написано, в материалах и методах просто указано, что рентабельность инвестиций «была выбрана вручную».Это заслуживает более подробного рассмотрения, поскольку главный вывод состоит в том, что изменения в центросомной интенсивности предшествуют изменениям в объеме (то есть растворение происходит до разрыва).

Мы добавили дополнительные сведения о количественном определении интенсивности центросом в раздел «Материалы и методы» (подраздел «Измерения интенсивности»). Мы определили «центросомальную» область как центриоли плюс область PCM, которая была физически связана с центриолями, как определено нашим методом пороговой обработки.Эта область была выбрана вручную как для измерения интенсивности, так и для измерения объема. Во время периода растворения интенсивность ИКМ была фактически всей отображаемой ИКМ, поскольку дыры не были заметны в ИКМ до нескольких минут спустя. Как только произошел разрыв и стали очевидны дыры, мы включили только ту область ПКМ, которая примыкала к центриолям, для измерений интенсивности и объема. Другие несмежные области считались пакетами, если они были четко индивидуализированы от центриолей и смежных PCM.

Рецензент № 3:

[…] Прежде чем рукопись будет признана подходящей для публикации в eLife, авторам необходимо решить следующие проблемы.

1) На всех рисунках авторы показывают растворение компонентов ПКМ СПД-2 и МТЗ-1 без разрыва и пакетов, наблюдаемых для СПД-5 и ГИП-1. Однако более поздние временные точки действительно показывают два сильных очага для СПД-2 и МТЗ-1. Представляют ли они дублированные центриоли с ассоциированным PCM? Авторы никогда не описывали эти очаги в тексте или подписях к рисункам, и им необходимо более полно описать изображения, которые они представляют, чтобы читатель полностью понял эти результаты.

Два ярких фокуса действительно являются разделяющими центриолями и вновь образующимися центросомами. Мы обозначили эти структуры на рисунках соединенными двойными стрелками и добавили ссылку на них в тексте (подраздел «PCM-белки с разным поведением», первый абзац) и в подписях к рисункам.

2) Подобно приведенному выше комментарию (1), на графиках, показывающих количественную оценку интенсивности пакета (Рисунок 2E), интенсивности центросомы (Рисунок 3D) и объема в центросоме (Рисунок 3E), авторы исключают яркие фокусы для SPD. -2 и МЗТ-1 или есть в комплекте? Поскольку графики в некоторых случаях показывают уровни сигнала, близкие к нулю, предположительно, эти яркие фокусы каким-то образом исключены, но текст и подписи к рисункам не относятся к этой проблеме.Опять же, для наглядности, авторам следует более полно описывать данные изображения в подписях к рисункам и тексте. Материалы и методы, кажется, относятся к этой проблеме в отношении рисунков 5E и 5F, но мне не ясно, как именно эти количественные оценки были сделаны в отношении двух ярких фокусов, обнаруженных в более поздние моменты времени.

См. Наш ответ на комментарий 1 рецензента 2. Что касается интенсивности и объема центросом, мы вручную измерили центриоли и физически смежный PCM для наших количественных оценок.Обратите внимание, что на наших графиках для интенсивности показаны произвольные единицы x 10 ⁵ , поэтому минимальные значения составляют порядка 20 000. Наши измерения объема уменьшаются до <1-2 микрон ³ , но не равны нулю. Это измерение было бы ожидаемым для голых центриолей, учитывая их размеры и метод ограничения дифракции, который мы использовали для наших количественных оценок. По сравнению с очень большим размером зрелых центросом, этот маленький размер еще более преувеличен.

3) На рисунке 2 авторы показывают, что SPD-5 ​​и GIP-1 обнаруживаются в пакетах во время разборки.Однако на рисунке 2A показано, что SPD-5 ​​присутствует только в двух фокусах в «ранних пакетах», тогда как на рисунке 2B есть несколько фокусов SPD-5 ​​в ранних пакетах. Таким образом, совместная локализация SPD-5 ​​и GIP-1 на раннем этапе оказывается очень ограниченной. Авторы не упоминают об этом ни в тексте, ни в легенде. Насколько сильно перекрываются SPD-5 ​​и GIP-1 в пакетах? Существуют ли некоторые пакеты только с одним или другим, а некоторые с обоими, и могут ли авторы количественно оценить это перекрытие? Было бы полезно узнать больше о точном характере их совместной локализации.

Мы случайно поменяли местами однопанельные изображения SPD-5 ​​и GIP-1 на рис. 2A, хотя при слиянии они были правильно окрашены. Белки действительно колокализуются в ранних пакетах, просто в пакетах значительно больше SPD-5, чем GIP-1. Эта совместная локализация также недолговечна, поскольку более поздние пакеты теряют GIP-1, а также ассоциацию с микротрубочками (Рис. 2A и 2B, поздний пакет).

Количественная оценка перекрытия оказалась сложной из-за относительно тусклой природы пакетов по сравнению с окружающей цитоплазмой, эфемерной природы пакетов и смеси пакетов с постоянным PCM, что побудило нас взглянуть на микротрубочки и EBP-2 / EB1. дополнительно подтвердить, сохраняют ли пакеты потенциал MTOC.

4) Авторы называют «разрыв» и «формирование пакета» взаимозаменяемыми. В легенде на Рисунке 3 эти термины определяются со ссылкой на стрелки, но они никогда не ссылаются на конкретные изображения, поясняющие эти термины. Авторы должны ссылаться на конкретные изображения на рисунках, которые показывают «дыры» в матрице SPD-5 ​​/ GIP-1, которые составляют разрыв, и изображения, которые показывают внешний вид отдельных пакетов. В то время как графики на Рисунке 3 показывают разрыв, происходящий через 6 минут, SPD-5 ​​явно фрагментирован через 5 минут на Рисунке 3C, и что-то вроде «дыр» видно через 4 минуты на Рисунке 3C.Меня смущает использование этих двух терминов, которые, кажется, подразумевают разные фазы разборки, но также кажутся просто разными стадиями одного и того же процесса. Было бы полезно уточнить эти термины.

Разрыв — это постепенный процесс, который начинается с образования дырок в PCM и в конечном итоге приводит к формированию пакета. Мы видим некоторые вариации в том, когда происходит разрыв, и для ясности включили изображения на рисунки, которые представляют среднее время разрыва. Мы также включили более подробное описание того, что мы определяем как разрыв в текст (подраздел «Белки PCM разбираются с различным поведением», последний абзац).Мы также исключили формирование пакета как независимый шаг на рисунках для ясности, поскольку мы рассматриваем его как часть разрыва.

5) При рассмотрении кортикальных сил, способствующих формированию / разложению пакетов на рисунке 4, текст относится к разрыву, начинающемуся через 6 минут после NEBD, и формированию пакетов через 8 минут у контрольных эмбрионов / эмбрионов WT (подраздел «Корковые силы опосредуют разборка ПКМ а точнее СПД-5 », абзац второй). Однако цифра составляет всего 7 минут.Более того, SPD-5 ​​показывает отдельные точки через 5 минут на контрольном рисунке 1A и то, что кажется определенными пакетами через 6 минут. Таким образом, текстовое описание не очень соответствует тому, что показано на рисунке. Это требует пояснения.

См. Наш ответ на пункт 4 выше. Мы разъяснили, что мы подразумеваем под разрывом в тексте, и включили в рисунки изображения, которые отражают среднее значение разрыва, хотя есть некоторые различия во времени этого процесса.Мы исключили «формирование пакета» как отдельный шаг, поскольку мы рассматриваем его как часть процесса разрыва.

6) Во втором абзаце подраздела «Корковые силы опосредуют разборку ПКМ и, в частности, SPD-5», авторы ссылаются на увеличение или уменьшение интенсивности и объема SPD-5 ​​с помощью grp-1/2 или csnk. -1 истощение. Что увеличивается, а что уменьшается, и на каком фоне. Я не мог понять это предложение в том виде, в каком оно написано, и мне казалось, что на Рисунке 4 нокдауны привели только к увеличению.

Мы разъяснили это заведомо сбивающее с толку утверждение, чтобы отразить снижение интенсивности SPD-5 ​​после истощения csnk-1 и увеличение интенсивности SPD-5 ​​после истощения grp-1/2 : «Интересно, что уровни SPD-5 ​​на PCM увеличилось на gpr-1/2 и уменьшилось на csnk-1 истощения (Рисунок 4A, Рисунок 4 — приложение к рисунку 1A) ».

7) Во втором параграфе Обсуждения авторы заявляют, что удаление белков ПКМ из внутренней сферы ослабляет оставшиеся ПКМ, допускает разрыв внешней сферы.Это сформулировано так, как если бы это был четкий вывод, но какие данные подтверждают эту интерпретацию / вывод, или это модель и предположение?

Это заявление действительно было домыслом. Мы значительно переработали нашу дискуссию и удалили это утверждение.

8) Авторы цитируют Enos et al., 2018, как показано, что PP2A и кортикальные силы необходимы для разборки ПКМ. Таким образом, два фактора, которые способствуют разборке, уже были опубликованы.Однако Enos et al. исследовали только SPD-5 ​​и никакие другие компоненты PCM и не делали различий между растворением и растворением как двумя отдельными процессами. Они просто относятся к PP2A и кортикальным силам как к двум независимым вкладам, не относя их к отдельным аспектам разборки. Таким образом, работу Enos et al., 2018 можно рассматривать как делающую представленные здесь результаты в некоторой степени инкрементными и, возможно, более подходящими для публикации в более специализированном журнале. Но Magescas et al.действительно предоставляют новые открытия относительно слоистой природы PCM у C. elegans и существенно более глубокий анализ разборки PCM. Авторам необходимо более подробно рассмотреть, как их анализ выходит за рамки того, что было показано Эносом и др., Либо в Результатах, либо в Обсуждении. Это можно было бы сделать вкратце, но мне кажется, что такое сравнение оправдано, учитывая значительное количество совпадений в двух рукописях. Аналогичным образом, были ли ранее отмечены какие-либо доказательства этой частичной независимости локализации SPD-2 и SPD-5?

См. Наш ответ на комментарий 2 рецензента 1.Мы также изменили Обсуждение, чтобы выделить различия между двумя нашими статьями. Нам неизвестны какие-либо другие указания в литературе на частичную независимость SPD-2 и SPD-5, и мы видим еще большую поддержку этой независимости в наших недавно добавленных экспериментах с ингибиторами, где SPD-2 может быть вытеснен из центросомы без воздействия на Локализация СПД-5.

[Примечание редакции: ответы автора на повторную рецензию приводятся ниже.]

Рецензент № 2:

[…] 1) Относится к описанию сфер и использованию конфокальной микроскопии.Важным моментом в этой статье является определение областей центросомы, занятых разными белками. Авторы описывают три области: центриоль, внутреннюю сферу и внешнюю сферу. Описание этих областей, наряду со сравнением с другими системами, в которых использовалась SIM, оставляет у читателя впечатление, что Spd2 (и другие белки) занимает тороидную (кольцевую) область, окружающую центриоль с краями 0,51-1,15, тогда как Spd5 занимает тороид (бублик) с ребрами 1,15-1.66. Я думаю, что представленные метод визуализации и данные не поддерживают эту точку зрения. Профили интенсивности на рисунке 1B предполагают, что примерно 80-90% Spd5 фактически находится в области локализации Spd2 от -1,15 до +1,15. Таким образом, нельзя сделать вывод, что белки находятся в разных местах.

Мы не намеревались создать впечатление, что SPD-2 и SPD-5 ​​образуют взаимосвязанные тороиды, а скорее, что SPD-2 и SPD-5 ​​локализуются во внутренней сфере и что только SPD-5 ​​распространяется во внешнюю сферу.С нашим подходом к визуализации мы не можем определить, есть ли дыра в любом из паттернов локализации, где находятся центриоли. Единственные тороиды, которые мы наблюдали, были с AIR-1 и TPXL-1, как сообщалось ранее. Если измерять расстояние от центра на половине максимальной интенсивности, SPD-2 находится в диапазоне от -0,575 до 0,575 ± 0,02, а SPD-5 ​​находится в диапазоне от -0,83 до 0,83 ± 0,03 мкм. 77,8 ± 0,8% СПД-5 находится в ограниченной области СПД-2. Эти значения теперь указаны во втором абзаце подраздела « C.elegans PCM разделен на внутреннюю и внешнюю сферы ». Мы также изменили наш график на Рисунке 1C и наш рисунок на Рисунке 1D, чтобы прояснить эти моменты.

Ответ авторов, связанный с комментарием рецензента о том, почему SIM не использовалась в этом исследовании, не подтверждает получение изображений SIM, сделанных на эмбрионах дрозофилы (также живом организме) для описания зон центросом (Lerit et al. 2015), и многие формы публикации лаборатория Раффа (например, Conduit et al. 2014) и даже SIM-карта червя (PMID: 28103229).Могу только сделать вывод, что SIM-карта очень возможна и обычна. Учитывая, что SIM не проводился в этом исследовании, описание авторов этих белков как «отличная локализация», «дискретные слои» и «новые белковые территории» (письмо с опровержением) не подтверждается данными. Я рекомендую следующее:

— Измените описание на «внешний край малой сферы spd2» и «внешний край большей сферы Spd5». Таким образом, автор не поймет неправильно локализацию как тороиды.

Мы изменили наше описание на

«Локализация SPD-2 и SPD-5 ​​в PCM взаимозависима (Hamill et al., 2002; Kemp et al., 2004; Pelletier et al., 2004), однако эти белки демонстрировали четкие внешние границы локализации в пределах ПКМ; как SPD-2, так и SPD-5 ​​локализованы в более проксимальной области, окружающей центриоли (расстояние от центра на половине максимальной интенсивности для SPD-2: -0,575 — 0,575 ± 0,02 мкм; 77,8 ± 0,8% от общего количества SPD-5, перекрывающегося с SPD -2 в этой области), а SPD-5 ​​простирался более дистально до области, в которой отсутствует SPD-2 (расстояние от центра на половине максимальной интенсивности для SPD-5: -0.83 — 0,83 ± 0,03 мкм; Рисунок 1B-C). Основываясь на внешнем крае этих двух матричных белков, мы разделяем PCM на «внутреннюю» и «внешнюю» сферу, причем меньшая внутренняя сфера определяется внешним краем локализации SPD-2, а большая внешняя сфера определяется внешней сферой. край СПД-5

локализация (рисунок 1D) ».

— Укажите размеры внешнего края на рисунке 1D.

Мы сообщили об этом измерении (см. Выше и пояснение на Рисунке 1). Мы также изменили наш график на рисунке 1C, чтобы более четко отображать внешние границы локализации (т.е.е. расстояние от центра при половине максимальной интенсивности).

— Сообщите% от общего Spd5, который перекрывается с Spd2 (от -1,15 до 1,15) и выходит за пределы сферы Spd2 (<-1,15 +> 1,15), используя площадь под кривой. Таким образом, читатель получит лучшее впечатление, что на самом деле существует лишь небольшое количество Spd5, которое не пересекается с Spd2.

Теперь мы указываем общий процент во втором абзаце подраздела « C. elegans PCM разделен на внутреннюю и внешнюю сферы» (77.8 ± 0,8% от общего количества СПД-5, совпадающих с СПД-2 в этом регионе).

— смягчить сравнение между этими измерениями и предыдущими отчетами SIM. Данные в этом исследовании не показывают никакой тороидной структуры, кроме TPXL-1 и AIR-1; таким образом, например, прямое сравнение с Cnn не поддерживается. Сравнение с другими системами следует зарезервировать для будущего исследования SIM.

Мы смягчили наше сравнение:

«Хотя наш подход к визуализации не позволил нам разрешить паттерны тороидальной локализации большинства проанализированных нами белков PCM, границы локализации белка PCM соответствуют общему паттерну предсказанных ортологов у Drosophila и клеток человека».