Создание стабильного штамма-продуцента полноразмерного антитела человека на примере антитела против вируса эктромелии | Матвеев
1. Baykov I.K., Khlusevich Ya.A., Matveev A.L., Tikunova N.V. Construction of cassette vector plasmids for production of full-size recombinant antibodies. Vestnik NGU: Seriya biologicheskaya, klinicheskaya meditsina = Herald of the Novosibirsk State University. Series: Biology and clinical medicine. 2013;11(3):56-64. (in Russian)
2. Baykov I.K., Matveev A.L., Stronin O.V., Ryzhikov A.B., Matveyev L.E., Kasakin M.F., Richter V.A., Tikunova N.V. A protective chimeric antibody to tick-borne encephalitis virus. Vaccine. 2014; 32(29):3589-3594.
3. Coroadinha A.S., Schucht R., Gama-Norton L., Wirth D., Hauser H., Carrondo M.J. The use of recombinase mediated cassette exchange in retroviral vector producer cell lines: predictability and efficiency by transgene exchange. J. Biotechnol. 2006;124(2):457-468.
4. Crickard L., Babas T., Seth S., Silvera P.
, Koriazova L., Crotty S. Protection of rabbits and immunodeficient mice against lethal poxvirus infections by human monoclonal antibodies. PLoS ONE. 2012; 7(11):e48706.
5. Fernandez J., Yaman I., Merrick W.C., Koromilas A., Wek R.C., Sood R., Hensold J., Hatzoglou M. Regulation of internal ribosome entry sitemediated translation by eukaryotic initiation factor-2α phosphorylation and translation of a small upstream open reading frame. J. Biol. Chem. 2002;277(3):2050-2058.
6. Hirata R., Chamberlain J., Dong R., Russell D.W. Targeted transgene insertion into human chromosomes by adeno-associated virus vectors. Nat. Biotechnol. 2002;20:735-738.
7. Hopkins R.J., Lane J.M. Clinical efficacy of intramuscular vaccinia immune globulin: a literature review. Clin. Infect. Dis. 2004;39(6): 819-826.
8. Huang Y., Li Y., Wang Y.G., Gu X., Wang Y., Shen B.F. An efficient and targeted gene integration system for high-level antibody expression. J. Immunol. Methods. 2007;322(1-2):28-39.
9. Kameyama Y., Kawabe Y., Ito A., Kamihira M. An accumulative site-specific gene integration system using Cre recombinase-mediated cassette exchange. Biotechnol. Bioeng. 2010;105(6):1106-1114.
10. Khlusevich Y.A., Morozova V., Pyshnyi D.V., Tikunova N.V. Antibodies against ectromelia virus capable of neutralizing variola virus: generation and application for epitope mapping. FEBS J. 2013; 280(S1):371-372.
11. Khlusevich Y.A., Tikunova N., Morozova V., Bulychev L., Bormotov N., Vlasov V., Sergeev A. Sredstvo dlya neytralizatsii virusa natural’noy ospy [The agent for neutralizing variola virus]. Patent RF No. 2515905, 2014б. (in Russian)
12. Khlusevich Ya., Tikunova N., Morozova V., Grigor’eva A., Baykov I., P’yankov O. Rekombinantnaya plazmidnaya DNK pQE-p35d, obespechivayushchaya sintez rekombinantnogo belka p35d virusa ospy korov, shtamm bakteriy Escherichia coli – produtsent rekombinantnogo belka r35d virusa ospy korov i rekombinantnyy belok r35d virusa ospy korov, ispol’zuemyy dlya sozdaniya test-sistem i konstruirovaniya sub’edinichnykh vaktsin protiv ortopoksvirusnykh infektsiy [Recombinant plasmid DNA pQE-p35d providing synthesis of p35d recombinant protein of cowpox virus, Escherichia coli bacterial strain that is producer of p35d recombinant protein of cowpox virus and p35d recombinant protein of cowpox virus used to engineer test systems and to design orthopoxvirus split vaccines].
Patent RF No. 2511037, 2014а. (in Russian)
13. Kito M., Itami S., Fukano Y., Yamana K., Shibui T. Construction of engineered CHO strains for high-level production of recombinant proteins. Appl. Microbiol. Biotechnol. 2002;60(4):442-448.
14. Kwaks T.H., Barnett P., Hemrika W., Siersma T., Sewalt R.G., Sa tijn D.P., Brons J.F., van Blokland R., Kwakman P., Kruckeberg A.L., Kelder A., Otte A.P. Identification of anti-repressor elements that confer high and stable protein production in mammalian cells. Nat. Biotechnol. 2003;21(5):553-558.
15. Little M., Breitling F., Dübel S., Fuchs P., Braunagel M., Seehaus T., Klewinghaus I. Universal antibody libraries on phage and bacteria. Year Immunol. 1993;7:50-55.
16. Lucas B.K., Giere L.M., DeMarco R.A., Shen A., Chisholm V., Crowley C.W. High-level production of recombinant proteins in CHO cells using a dicistronic DHFR intron expression vector. Nucleic Acids Res. 1996;24(9):1774-1779.
17. Matho M.H., Schlossman A., Meng X.
, Benhnia M.R., Kaever T., Buller M., Doronin K., Parker S., Peters B., Crotty S., Xiang Y., Zajonc D.M. Structural and functional characterization of anti-A33 antibodies reveal a potent cross-species orthopoxviruses neutralizer. PLoS Pathog. 2015;11.
18. McCausland M.M., Benhnia M.R., Crickard L., Laudenslager J., Granger S.W., Tahara T., Kubo R., Koriazova L., Kato S., Crotty S. Combination therapy of vaccinia virus infection with human anti-h4 and anti-B5 monoclonal antibodies in a small animal model. Antivir. Ther. 2010;15(4):661-675.
19. Mutskov V., Felsenfeld G. Silencing of transgene transcription precedes methylation of promoter DNA and histone h4 lysine 9. EMBO J. 2004;23(1):138-149.
20. Petrov I.S., Goncharova E.P., Kolosova I.V., Pozdnyakov S.G., Shchelkunov S.N., Zenkova M.A., Vlasov V.V. Antitumor effect of the LIVPGFP recombinant vaccinia virus. Doklady RAN = Proceedings of the Russian Academy of Sciences. 2013;451(5):592-597. DOI 10.7868/ S0869565213240274.
(in Russian)
21. Reichert J.M. Antibodies to watch in 2016. MAbs. 2016;8(2):197-204.
22. Reichert J.M. Antibodies to watch in 2017. MAbs. 2017;9(2):167-181.
23. Richards E.J. Chromatin methylation: who’s on first? Curr. Biol. 2002; 12(20):694-695.
24. Tasic B., Miyamichi K., Hippenmeyer S., Dani V.S., Zeng H., Joo W., Zong H., Chen-Tsai Y., Luo L. Extensions of MADM (Mosaic Ana lysis with Double Markers) in mice. PLoS ONE. 2012;7(3):e33332. DOI 10.1371/journal.pone.0033332.
25. Tikunova N., Dubrovskaya V., Morozova V., Yun T., Khlusevich Y., Bormotov N., Laman A., Brovko F., Shvalov A., Belanov E. The neutralizing human recombinant antibodies to pathogenic Orthopoxviruses derived from a phage display immune library. Virus Res. 2012;163(1):141-150.
26. Wilson C.J., Guglielmo C., Moua N.D., Tudor M., Grosveld G., Young R.A., Murray P.J. Yeast artificial chromosome targeting technology: an approach for the deletion of genes in the C57BL/6 mouse. Anal. Biochem.
2001;296(2):270-278.
27. Wirth D., Gama-Norton L., Riemer P., Sandhu U., Schucht R., Hauser H. Road to precision: recombinase-based targeting technologies for genome engineering. Curr. Opin. Biotechnol. 2007;18(5): 411-409.
28. Zahn-Zabal M., Kobr M., Girod P.A., Imhof M., Chatellard P., de Jesus M., Wurm F., Mermod N. Development of stable cell lines for production or regulated expression using matrix attachment regions. J. Biotechnol. 2001;87(1):29-42.
5 признаков эмоционально нестабильного мужчины, который разобьет вам сердце
203 533
Мужчина и женщина
Конечно, не стоит считать всех тех, кто эмоционально нестабилен, плохими и не нужно их демонизировать. Они не способны создавать и поддерживать здоровые отношения с другими людьми, поскольку их отношения с собой сейчас переживают не лучшие времена. Чтобы стать надежными для вас, они сперва должны стать надежными для себя самих. А для этого им придется приложить массу усилий, и никто не заставит их это сделать, пока они сами не захотят.
Вы тоже не наставите их на путь истинный.
И если потенциальный партнер встал на путь исцеления, лучше подождать, пока он не пройдет его до конца. Потому что до этого момента его внимание и силы будут направлены исключительно на него самого. Если вы не хотите ходить с разбитым сердцем (а если хотите, возможно, вам тоже нужно подумать о своей эмоциональной нестабильности), то обратите внимание на эти пять признаков.
1. Он доверяет всем, кроме себя
Отсутствие доверия к себе — признак травмы, чаще всего полученной в детстве. Детские травмы нередко побуждают людей отказаться от самих себя и своих потребностей, чтобы выжить. Становясь взрослыми, они буквально отдают свою силу всем вокруг и от этого страдают. Возможно, вам приятно ощущать их доверие. Но спросите себя: это доверие основано на особой близости, которая прошла испытание временем, или на том, что этот человек просто катастрофически не уверен в себе? Во втором случае доверие не имеет к вам отношения — это лишь следствие незаживающих душевных ран.
Почему отсутствие веры в себя означает, что этот человек причинит вам боль? Потому что он легко поддается малейшему влиянию. У него нет собственных моральных ориентиров, они еще не выработаны. Полагаться лучше на того, кто может положиться сам на себя. Такой человек в случае необходимости сможет поддержать не только себя, но и вас.
2. Он постоянно жалуется на здоровье
Это не значит, что малейшее недомогание или какой-то диагноз должны вас моментально отпугивать. Но человек, то и дело жалующийся на упадок сил и подозревающий у себя все возможные болезни, не самый лучший кандидат для привязанности. Часто привычка излишне страдать из-за своего физического состояния говорит о низкой самооценке и о том, что вся энергия человека будет уходить на попытки справиться с неким загадочным недомоганием, а не на развитие и укрепление отношений. Вероятно, что ему и правда нужно сейчас сосредоточиться на себе. Но ресурса для вас уже не останется.
3. Он использует «допинг»
Алкоголь, наркотики, лекарства по рецепту, даже переедание, — тревожный симптом.
Человек, зависящий от «допинга», не способен на настоящую близость с кем-то другим, потому что он чувствует себя комфортно только после употребления чего-то. Оно меняет его настроение, создает искусственную личность.
Чем чаще человек нуждается в новой «дозе», тем менее стабильно его эмоциональное состояние. И для него вы никогда не будете на первом месте. На первом месте всегда будет зависимость. Наверное, вы сейчас подумали: «Но ведь вокруг так много пар, в которых один из партнеров или оба что-то употребляют». Да, но это лишь говорит о том, что в этих отношениях есть эмоционально нестабильный человек, а то и сразу два. Отношения у них, может, и есть, но это не значит, что их союз здоровый.
4. У него большой опыт «плохих» отношений
Если у вас есть возможность проанализировать предыдущие отношения партнера, сделайте это. Он неоднократно позволял другим обращаться с собой неуважительно и долго оставался в отношениях, в которых ему явно было плохо? Это с большой вероятностью говорит о том, что он не ценит себя и считает, что недостоин любви и уважения.
Чем более недостойным он считает себя, тем больше он будет нуждаться в вашем подтверждении его ценности. Но вы никогда не сможете заполнить эту черную дыру, даже если будете стараться изо всех сил. Это созависимые отношения, которые неизбежно приведут к страданиям для вас обоих. Эмоционально стабильный партнер уверен в себе. Он скромен, но при этом знает себе цену и не нуждается в том, чтобы вы «подкармливали» его эго.
5. Он видит жизнь в черном цвете
Пессимистичный подход и отсутствие веры в успех любого, даже самого ерундового дела должны вас насторожить. Если человек смотрит на жизнь сквозь призму потенциальной неудачи, он так же будет смотреть на вас и ваши отношения. Эмоциональная нестабильность не делает человека плохим или обреченным на одиночество, она лишь означает, что сейчас ему нужно сконцентрироваться на себе и своем душевном состоянии. Самостоятельно и по собственному желанию, а не по вашей указке и не с вашей помощью. И не нужно затаиваться рядом в ожидании, когда он наконец изменится, позвольте ему разобраться со своей жизнью самому.
Об авторе: Хизер Хэнс, психотерапевт, автор книги «Любовь к себе: как сиять уверенно».
Текст:Полина ФранкеИсточник фотографий:Getty Images
Новое на сайте
Мадонна или блудница: почему мужчина видит в женщине либо мать, либо любовницу — объяснение психологов
«День на раздумье»: как живут россияне, эмигрировавшие из страны
Топ-25 лучших отечественных сериалов-2022: проверьте, не пропустили ли вы самое интересное
«Окружающим нравятся мои стихи, а я считаю себя бездарной рифмоплеткой»
Тело громко намекает: 6 признаков, что вы игнорируете свои истинные желания
Месяц счастья: как поддержать себя и других в трудные времена
Жизнь после 30 лет: 8 открытий — подготовьтесь к ним
«Я сгоряча разорвала отношения с парнем. Потом пожалела, но было поздно»
3 черты стабильного человека
Несколько лет назад я был потрясен, когда слушал песню под названием «Якорь». Не вдаваясь в подробности песни, меня поразила одна строчка…
«Якорь держится в эпицентре бури…»
Это символизирует жизненные трудности и порой непредсказуемые трудности, которые может принести жизнь.
. Когда я думаю об «удержании» якоря, я нахожу прекрасное применение тому, как можно изменить нашу жизнь, чтобы она стала более прочной по своей природе.
Якорь служит нескольким целям.
Он олицетворяет безопасность, согласованность и надежность. Якорь представляет собой безопасность, поскольку его можно сбросить с корабля, чтобы проверить глубину, крепко удерживать его и / или предотвратить движение корабля во время шторма.
Якорь согласован. Он сделан из твердой стали или железа и надежен в том смысле, что мы верим, что он будет делать то, что должен делать. Со временем это зарекомендовало себя.
Якорь также символизирует прочность. Он никуда не денется, если нет цели двигаться. Он не сломается, не согнется и не потеряет сцепление после закрепления.
Мы все, я уверен, хотели бы, чтобы наша собственная жизнь воплощала в себе характеристики якоря. Итак, как мы это делаем?
#1 Станьте безопасным местом для себя и других.
Слушай, люби, смейся и выражай благодарность. Не предавайте доверие и не становитесь сплетником.
Безопасность означает, что вы можете доверять себе, и другие могут доверять вам. Лучше всего начать в этой области через прочные отношения с Богом, поскольку Он является воплощением безопасности (на самом деле в песне, на которую я ссылался, якорем является Бог).
Другие будут буквально привлечены к вашему присутствию из-за безопасности, которую вы представляете.
#2 Стать последовательным.Привычно делать мелочи правильно. Отвечайте на звонки, сообщения и держите слово. Не преувеличивайте и не говорите того, чего не имеете в виду.
Быть «следящим» человеком. Поддерживайте свое здоровье – физическое, эмоциональное, интеллектуальное и духовное. Это требует усердия, ежедневно посвящая время улучшению каждой из этих областей.
Последовательность окупится. Люди увидят вашу надежность, и ваша надежность возрастет.
#3 Стань всесторонне развитым человеком.
Научитесь вести себя в толпе, но чувствовать себя комфортно в одиночестве. Практикуйте социальное достоинство и грацию, будучи целеустремленными во всех своих действиях и словах.
Не двигайтесь слишком быстро или слишком медленно. Спокойствие под давлением — ключ к успеху. Когда жизненные бури воздействуют на вас, вы не будете тронуты.
Стать ЯКОРЕМ означает стать представителем безопасности, последовательности и солидности. Мы должны понимать, что для того, чтобы стать якорем, требуется много работы, усилий и стойкости с течением времени. Это не произойдет в одночасье.
Это ты? Вы якорь?
Я хочу, чтобы у вас была способность держаться крепко и твердо, когда приходит буря. Если вы не практикуете вышеизложенное в отношении развития своего личного «якоря», самое время начать сегодня.
Якорь нужен тебе самому, а также твоей семье, друзьям и знакомым. Не становитесь «мертвым грузом» из-за собственного бездействия.
Давайте станем ЯКОРЯМИ, которыми должны были быть.
Эмоционально стабильные люди делают эти 7 вещей по-другому
Раскрытие информации: эта страница содержит партнерские ссылки для избранных партнеров. Мы получаем комиссию, если вы решите совершить покупку после нажатия на них.
Поговорите с аккредитованным и опытным терапевтом, который поможет вам стать более эмоционально стабильным человеком. Просто нажмите здесь, чтобы связаться с одним из них через BetterHelp.com.
Эмоциональная стабильность напрямую способствует счастью и хорошей жизни. Без этого вы рискуете впасть в паттерн ревности, стресса, душевной боли и депрессии.
К счастью, каждый может сделать выбор в пользу улучшения своего эмоционального здоровья. Вы можете изменить образ своего мышления и изменить свои повседневные привычки, чтобы стать более эмоционально успешным и улучшить качество своей жизни.
Что значит быть эмоционально стабильным? Это означает выбирать действия и мысли, которые непосредственно способствуют ощущению спокойствия и безмятежности.
Это означает выработать привычки, которые принесут гармонию в вашу жизнь и ваше взаимодействие со всем и всеми.
Как стать более эмоционально стабильным? Что ж, для начала вы можете попробовать перенять некоторые из этих привычек, типичных для эмоционально стабильных людей.
1. Они говорят НЕТ
Эмоционально устойчивые люди знают, когда и как сказать нет. Они не берут на себя чрезмерных обязательств и не дают ложных обещаний. Они просто отказываются от просьб, которые не хотят выполнять или на которые у них нет времени.
В то время как неуравновешенные люди не умеют говорить «нет» и часто ими пользуются, уверенные в себе люди понимают, что у них нет времени на все.
У них всего двадцать четыре часа в сутках, поэтому они хотят провести эти часы с умом, занимаясь тем, что для них важнее всего.
Эти спокойные, но напористые люди тоже не стесняются говорить «нет», и им даже не нужно объяснять, почему они говорят «нет». Ведь «Нет» — это законченное предложение.
Чтобы сказать «нет», нужна уверенность. Мы все хотим радовать людей, делать счастливыми своих боссов и друзей и делать все, что в наших силах, для других.
Но когда мы берем на себя слишком много, мы плохо справляемся, перенапрягаемся и становимся несчастными. Мы слишком напрягаемся и из-за этого теряем чувство собственного достоинства и эмоциональную стабильность.
Если вы испытываете эмоциональные трудности из-за того, что у вас слишком много дел, и вы чувствуете себя подавленным, попробуйте сегодня сказать кому-нибудь «нет».
Не беспокойтесь, что можете сжечь мосты. Люди поймут. Вам не нужно быть грубым или злым, когда вы кому-то отказываете. Просто скажите человеку, который просит вашей помощи, что вы не можете вписать ее в свое расписание.
Приятно, правда?
2. Они принимают свои недостатки
Кто сказал, что эмоционально стабильные люди совершенны? Конечно не сами. Они знают, что они несовершенны, и принимают это.
Если бы они были идеальными, они бы перестали расти и развиваться.
Они никогда не перестанут расти. В мире есть чему поучиться, и они хотят впитать в себя как можно больше знаний.
Не нужно быть идеальным, а эмоционально устойчивый человек и не будет пытаться. Они с радостью расскажут вам все о своих недостатках и открыто признают свои недостатки. Они любят себя за то, кто они есть… и за то, кем они не являются!
Сила и счастье исходят изнутри, поэтому умение принимать себя таким, какой вы есть, имеет решающее значение для эмоциональной стабильности.
Всегда старайтесь искать позитив в любой ситуации. Даже если вы ошибетесь, всегда есть урок, который нужно извлечь, или область, которую нужно улучшить.
3. Они умеют слушать
Эмоционально устойчивые люди больше слушают, чем говорят. Они уверены в себе в том, что должны сказать, и поэтому не чувствуют необходимости говорить все время. Они отличные коммуникаторы благодаря своей способности слушать.
Более того, такие люди умеют принимать критические отзывы.
Вы не найдете их дующимися после получения совета от коллеги по их презентации. Они хотят знать ваше мнение, даже если не согласны с ним.
4. Они избирательны в отношении своего ближайшего окружения
Отношение заразно, и эмоционально стабильные люди знают, что компания, в которой они живут, повлияет на их взгляды на жизнь.
Негатив может серьезно повлиять на ваше эмоциональное здоровье. Поскольку стабильные люди не хотят, чтобы другие навязывали им негативную энергию, они избирательны в отношении тех, с кем хотят общаться.
Они не выставляют себя токсичным людям, которые могут сломать их защиту или понизить их боевой дух.
Негативные люди повсюду, и они более чем готовы забрать вас с собой. Охраняйте свой ближний круг и общайтесь только с теми людьми, которые поддерживают вас.
Если в вашей жизни есть кто-то, кто оказывает на вас негативное влияние, возможно, пришло время разорвать эту связь. Некоторые мосты нужно сжечь.
5. Они отказываются подчиняться
Эмоционально стабильные люди не покупаются на то, во что они не верят.
Вы не найдете их прыгающими на подножку каждой новой тенденции. Им просто все равно, «вписываются ли они» в толпу. Им комфортно в собственной шкуре.
Они не боятся не соглашаться со своей семьей, друзьями, коллегами или всем миром. Давление со стороны сверстников просто не входит в их словарный запас.
Чем в большей безопасности вы находитесь на эмоциональном уровне, тем более независимым вы становитесь. Вы больше не будете чувствовать необходимость приспосабливаться, потому что знаете, что уже это делаете.
В следующий раз, когда вы почувствуете необходимость сделать что-то, что не соответствует вашим ценностям или этике, спросите себя, какие эмоции связаны с этой потребностью вписаться. Признание своей эмоциональной уязвимости — первый шаг к ее преодолению.
Эмоционально стабильные люди не чувствуют угрозы, если им нужна помощь. Почему они? У самых успешных людей в мире есть целые команды, которые поддерживают их и помогают им добиться успеха.
Такой человек знает, что он не может сделать все это в одиночку, и он не собирается тратить время на попытки.
Они доверяют людям и не боятся просить (или нанимать) помощь.
Просьба о помощи не означает, что вы неудачник. Всем нам время от времени нужна помощь. Если вы испытываете трудности в какой-то сфере своей жизни, спросите себя, кто может вам помочь, а затем попросите о помощи!
7. Они поддерживают других
Эмоционально устойчивые люди любят подбадривать других. Им нравится помогать своим сверстникам добиваться успеха. Вы не найдете того, кто работает за чьей-то спиной или присваивает себе чужую работу.
Они будут аплодировать вам, когда вы преуспеете… и действительно серьезно! Эти люди — ваши болельщики, и они хотят, чтобы вы добились успеха. Они достаточно умны, чтобы понять, что, будучи связаны с другими успешными людьми, они также добьются успеха.
Если вы постоянно чувствуете приступы ревности или тайно желаете, чтобы другие потерпели неудачу, чтобы вы могли добиться успеха, вы поддаетесь своей эмоциональной слабости.
Эмоции — удивительные мотиваторы, они могут управлять нашим разумом и телом.