Быть разобрать по составу: Быть — разбор слова по составу (морфемный разбор)

Содержание

Разбор слов по составу

Разбор слова по составу

Тип лингвистического анализа, в результате которого определяется структура слова, а также его состав, называется морфемным анализом.

Виды морфем

В русском языке используются следующие морфемы:

— Корень. В нем заключается значение самого слова. Слова, у которых есть общий корень, считаются однокоренными. Иногда слово может иметь два и даже три корня.
— Суффикс. Обычно идет после корня и служит инструментом для образования других слов. К примеру, «гриб» и «грибник». В слове может быть несколько суффиксов, а может не быть совсем.
— Приставка. Находится перед корнем. Может отсутствовать.
— Окончание. Та часть слова, которая изменяется при склонении или спряжении.
— Основа. Часть слова, к которой относятся все морфемы, кроме окончания.

Важность морфемного разбора

В русском языке разбор слова по составу очень важен, ведь нередко для правильного написания слова необходимо точно знать, частью какой морфемы является проверяемая буква.

Многие правила русского языка построены на этой зависимости.

Пример

В качестве примера можно взять два слова: «чёрный» и «червячок». Почему в первом случае на месте ударной гласной мы пишем «ё», а не «о», как в слове «червячок»? Нужно вспомнить правило написания букв «ё», «е», «о» после шипящих, стоящих в корне слова. Если возможно поменять форму слова либо подобрать родственное ему так, чтобы «ё» чередовалась с «е», тогда следует ставить букву «ё» (чёрный — чернеть). Если чередование отсутствует, тогда ставится буква «о» (например, чокаться, шорты).

В случае же со словом «червячок» «-ок-» — это суффикс. Правило заключается в том, что в суффиксах, если стоящая после шипящих букв гласная находится под ударением, всегда пишется «о» (зрачок, снежок), в безударном случае — «е» (платочек, кармашек).

Как разобрать слово по составу

Для помощи начинающим существуют морфемно-орфографические словари. Можно выделить книги таких авторов, как Тихонов А.Н.

, Ожегов С.И., Рацибурская Л.В.

В любом слове непременно должны присутствовать корень и основа. Остальных морфем может и не быть. Иногда слово целиком может состоять из корня (или основы): «гриб», «чай» и т.д.

Этапы морфемного анализа

Чтобы морфемный разбор слов было легче осуществить, следует придерживаться определенного алгоритма:

— Сначала нужно определить часть речи, задав вопрос к слову. Для прилагательного это будет вопрос «какой?», для существительного — «что?» или «кто?».
— Затем нужно выделить окончание. Чтобы его найти, слово нужно просклонять по падежам, если часть речи это позволяет. Например, наречие изменить никак нельзя, поэтому у него не будет окончания.
— Далее нужно выделить основу у слова. Все, кроме окончания, — основа.

— Потом следует определить корень, подобрав родственные однокоренные слова.
— Определяется приставка, а потом суффиксы (при их наличии).

Особенности разбора

Иногда подход к морфемному разбору в программах университета и школы может отличаться. Во всех случаях различия аргументированы и имеют право на существование. Поэтому стоит ориентироваться на морфемный словарь, рекомендованный в конкретном учебном заведении.

Вопрос 1 из 20 Персонаж оперы бурятского композитора Д. Д. Аюшеева «Побратимы»
сарюн	склон
саван	сплин

Только что искали: эрамисс сейчас калагос сейчас кокост сейчас набор слов сейчас рыбалки сейчас степлер сейчас игласесо сейчас к а р а т и н сейчас д а х у т о 1 секунда назад габлинген 1 секунда назад у т к в н а г о р 1 секунда назад летикн 1 секунда назад т ц е н з о р 2 секунды назад обантри 2 секунды назад клеиднь 2 секунды назад

Как разобрать по составу слово «словарь»? Vovet.

Русский язык грамотность слоги словарь ударение разбор слова корень слова части слова разобрать по составу

Только в сентябре: получи кредитку по акции с бонусом 2000р. и годом без % Получить карту

Разбор по составу слова словарь? Куда падает ударение в слове словарь? Сколько слогов в слове словарь? Из каких частей состоит слово словарь? Морфемный разбор слова словарь?

Похвалить 2 Пожаловаться

2 ответа

В слове «словарь» два слога «сло» и «варь». Ударение падает на второй слог. Слово «словарь» является существительным мужского рода, неодуш., падеж может быть именительным или родительным.

Для того, чтобы провести морфемный разбор слова, выясним что он представляет из себя.

Морфемный разбор (разбор по составу) представляет собой выделение морфем (значимых частей слова).

Перечислим все морфемы, которые могут быть в составе слова:

приставка,
корень (в нем заключается лексическое значение слова, является главная часть слова),
суффикс,
окончание,
соединительная морфема,
постфикс (представляет собой часть слова, которая стоит после окончания или же формообразующего суффикса).

С слове «словарь» корнем является «слов», суффиксом «арь», окончание нулевое, приставки нет, основой слова «словарь».

Второй вариант морфемного разбора предлагается в морфемном словаре Тиханова. Корнем и основанием в этом случае является само слова «словарь».

Первый вариант, мне лично, более близок, так как именно так нас учили разбирать данное слово в школе в свое время. Сейчас, возможно, оба варианта являются верными.

Советую также:

Фонетический разбор слова «Солнце»
Как разобрать слово по составу «Доблестный»

Похвалить 8 Пожаловаться

Предлагаю вариант, который использовался в школе лет 17 назад. Это когда я училась.

нулевое окончание;
слов — корень;
арь — суффикс;
основа — все слово.

Если сейчас посмотреть в словарь, то можно найти вариант, что слово «словарь» состоит только из корня — словарь.

Возможно, это так и есть. Годы идут, и все меняется. Скоро и разбор слов можно будет делать так, как сам это представляешь.

Чтобы слово правильно разобрать, попробуйте подобрать к нему однокоренные слова, поизменяйте окончание. К примеру, словарный, словари, словаря, словарем и т. д.

Регуляция состава очаговых комплексов и их разборка кальций-зависимой протеазой кальпаином

. 2002 г., 1 сентября; 115 (часть 17): 3415-25.

doi: 10.1242/jcs.115.17.3415.

Амит Бхатт ¹ , Ирина Каверина, Кэрол Оти, Анна Хаттенлохер

принадлежность
¹ Кафедра педиатрии и фармакологии, Университет Висконсина, 1300 University Avenue, Медицинская школа Университета Висконсина, Мэдисон, Висконсин 53706, США.
PMID: 12154072
DOI: 10.1242/JCS.115.17.3415
Амит Бхатт и др. Дж. Клеточные науки. 2002 .
. 2002 г., 1 сентября; 115 (часть 17): 3415-25.
doi: 10.1242/jcs.115.17.3415.
Авторы
Амит Бхатт ¹ , Ирина Каверина, Кэрол Отей, Анна Хаттенлохер
принадлежность
¹ Кафедра педиатрии и фармакологии, Университет Висконсина, 1300 University Avenue, Медицинская школа Университета Висконсина, Мэдисон, Висконсин 53706, США.
PMID: 12154072
DOI: 10.1242/JCS.115.17.3415
Абстрактный

Миграция клеток требует регулируемого и динамичного оборота адгезивных комплексов. Ранее мы показали, что кальций-зависимая протеаза, кальпаин, регулирует организацию адгезивных комплексов и отделение клеток во время миграции клеток. В настоящее время предоставлены доказательства того, что ингибирование кальпаина за счет сверхэкспрессии эндогенного ингибитора кальпаина, кальпастатина и фармакологических ингибиторов приводит к ингибированию разборки адгезивного комплекса со стабилизацией GFP-винкулина и GFP/RFP-зиксина на периферии клетки. Кальпаин также был необходим для опосредованного микротрубочками оборота участков адгезивных комплексов после вымывания нокодазола, что указывает на то, что кальпаин может опосредовать фокальную разборку комплекса ниже по течению от микротрубочек. Используя двойную визуализацию RFP-зиксин и GFP-альфа-актинин, мы наблюдали временную и пространственную связь между локализацией альфа-актинина в фокальных контактах и последующей разборкой или транслокацией комплексов, содержащих RFP-зиксин, в области ретракции клеток. Ингибирование кальпаина нарушало локализацию альфа-актинина в фокальных контактах, содержащих зиксин, и разборку фокального комплекса или транслокацию в центр клетки. Кроме того, нарушение локализации альфа-актинина в фокальных комплексах посредством экспрессии палочковидного домена альфа-актинина, но не головного домена, приводило к ингибированию разборки фокальной адгезии, аналогичному ингибированию кальпаином. Наши исследования предполагают новый механизм действия, посредством которого кальпаин может модулировать локализацию альфа-актинина в фокальных комплексах и их последующую разборку или транслокацию.

Похожие статьи
Кальпаин-опосредованный протеолиз талина регулирует динамику адгезии.
Франко С.Дж., Роджерс М.А., Перрин Б.Дж., Хан Дж., Беннин Д.А., Кричли Д.Р., Хаттенлохер А. Франко С.Дж. и др. Nat Cell Biol. 2004 г., 6 октября (10): 977-83. дои: 10.1038/ncb1175. Epub 2004, 19 сентября. Nat Cell Biol. 2004. PMID: 15448700
Динамика альфа-актинина в фокальных спайках и стрессовых волокнах визуализируется с помощью альфа-актинин-зеленого флуоресцентного белка.
Эдлунд М., Лотано М.А., Отей К.А. Эдлунд М. и др. Клеточный подвижный цитоскелет. 2001 март; 48 (3): 190-200. doi: 10.1002/1097-0169(200103)48:33.0.CO;2-C. Клеточный подвижный цитоскелет. 2001. PMID: 11223950
Конформационное состояние Tes регулирует его зиксин-зависимое привлечение к фокальным адгезиям.
Гарвалов Б.К., Хиггинс Т.Е., Сазерленд Д.Д., Зеттл М., Скэплхорн Н., Кохер Т., Пиддини Э., Гриффитс Г., Уэй М. Гарвалов Б.К. и соавт. Джей Селл Биол. 2003 14 апреля; 161 (1): 33-9. doi: 10.1083/jcb.200211015. Джей Селл Биол. 2003. PMID: 12695497 Бесплатная статья ЧВК.
Зиксин не локализуется совместно с сосудорасширяющим фосфопротеином (VASP) на кончиках ламеллоподий и проявляет другую динамику по сравнению с винкулином, паксиллином и VASP в фокальных спайках.
Роттнер К., Краузе М., Джимона М., Смолл СП, Вехланд Дж. Роттнер К. и др. Мол Биол Селл. 2001 г., 12 октября (10): 3103-13. doi: 10.1091/mbc.12.10.3103. Мол Биол Селл. 2001. PMID: 11598195 Бесплатная статья ЧВК.
Дифференциальная динамика альфа-5-интегрина, паксилина и альфа-актинина при формировании и разборке спаек в мигрирующих клетках.
Лаукайтис К.М., Уэбб Д.Дж., Донаис К., Хорвиц А.Ф. Лаукайтис С.М. и соавт. Джей Селл Биол. 2001 25 июня; 153 (7): 1427-40. doi: 10.1083/jcb.153.7.1427. Джей Селл Биол. 2001. PMID: 11425873 Бесплатная статья ЧВК.
Посмотреть все похожие статьи
Цитируется
Адгезивные бактерии и паразитицидные продукты секреции цервикально-влагалищной микробиоты человека Lactobacillus gasseri обеспечивают неидентичную защиту клеток от Trichomonas vaginalis — индуцированного отслоения клеток.
Pradines B, Domenichini S, Lievin-Le Moal V. Прадинес Б. и соавт. Фармацевтика (Базель). 2022 31 октября; 15 (11): 1350. дои: 10.3390/ph25111350. Фармацевтика (Базель). 2022. PMID: 36355522 Бесплатная статья ЧВК.
Зависимое от силы и состояния клеток рекрутирование Piezo1 управляет динамикой фокальной адгезии и поступлением кальция.
Яо М., Тиджоре А., Ченг Д., Ли Дж.В., Харихаран А., Мартинак Б., Тран Ван Нье Г., Кокс К.Д., Шитц М. Яо М. и др. Научная реклама 2022 ноябрь 11;8(45):eabo1461. doi: 10.1126/sciadv.abo1461. Epub 2022 9 ноя. Научная реклама 2022. PMID: 36351022 Бесплатная статья ЧВК.
Эволюционная и физиологическая перспектива механизма адгезии клеток к субстрату для миграции клеток.
Фьерро Моралес Дж. К., Сюэ К., Рох-Джонсон М. Fierro Morales JC и др. Front Cell Dev Biol. 2022 25 августа; 10:943606. doi: 10.3389/fcell.2022.943606. Электронная коллекция 2022. Front Cell Dev Biol. 2022. PMID: 36092727 Бесплатная статья ЧВК. Обзор.
Дифференциальная экспрессия интегриновых адгезивов определяет резидентность человеческих NK-клеток и стадию развития.
Хегевиш-Соллоа Э., Сео С., Манди-Боссе Б.Л., Мишра А., Вальдман Э.Х., Моррас С., Грунштейн Э., Коннорс Т.Дж., Фрейд А.Г., Мейс Э.М. Хегевиш-Соллоа Э. и соавт. Дж Иммунол. 2021 1 августа; 207 (3): 950-965. doi: 10.4049/jimmunol.2100162. Epub 2021 19 июля. Дж Иммунол. 2021. PMID: 34282002 Бесплатная статья ЧВК.
Роль эффектора TarP Chlamydia типа III после инвазии в модулировании динамики и организации фокальных спаек клеток-хозяев.
Педроса А.Т., Мерфи К.Н., Ногейра А.Т., Бринкворт А. Дж., Туэйтес Т.Р., Аарон Дж., Чу Т.Л., Карабео Р.А. Педроса А.Т. и соавт. Дж. Биол. Хим. 2020 23 октября; 295(43):14763-14779. doi: 10.1074/jbc.RA120.015219. Epub 2020 25 августа. Дж. Биол. Хим. 2020. PMID: 32843479 Бесплатная статья ЧВК.
Просмотреть все статьи «Цитируется по»
Типы публикаций
термины MeSH
вещества
Грантовая поддержка
5K08 CA 76631/CA/NCI NIH HHS/США
R01 CA85862-01/CA/NCI NIH HHS/США
Формирование, разборка и состав стрессовых гранул регулируются активностью АДФ-рибозилгидролазы альфавируса
. 2021 9 февраля; 118 (6): e2021719118.
doi: 10.1073/pnas.2021719118.
Аравинт Кумар Джаябалан ¹ , Шриватсан Адиварахан ² , Аакаш Коппула ³ , Рэйчи Абрахам ⁴ , Мона Батиш ^{3
5} , Даниэль Зенклузен ² , Дайан Э. Гриффин ⁴ , Энтони К.Л. Леунг ^{6
7
8}
Принадлежности
¹ Кафедра биохимии и молекулярной биологии, Школа общественного здравоохранения Блумберга, Университет Джона Хопкинса, Балтимор, Мэриленд, 21205.
² Департамент биохимии и молекулярной медицины, Университет Монреаля, Монреаль, QC h4T 1J4, Канада.
³ Факультет биологических наук, Делавэрский университет, Ньюарк, Делавэр, DE 19716.
⁴ W. Harry Feinstone Кафедра молекулярной микробиологии и иммунологии, Школа общественного здравоохранения Блумберга, Университет Джона Хопкинса, Балтимор, Мэриленд, 21205.
⁵ Кафедра медицинских и молекулярных наук, Делавэрский университет, Ньюарк, Делавэр, DE 19716.
⁶ Кафедра биохимии и молекулярной биологии, Школа общественного здравоохранения Блумберга, Университет Джона Хопкинса, Балтимор, Мэриленд, 21205; anthony. [email protected].
⁷ Кафедра молекулярной биологии и генетики, Медицинский факультет Университета Джона Хопкинса, Балтимор, Мэриленд, 21205.
⁸ Кафедра онкологии, Медицинский факультет, Университет Джона Хопкинса, Балтимор, Мэриленд 21205.
PMID: 33547245
PMCID: PMC8017970
DOI: 10.1073/пнас.2021719118
Бесплатная статья ЧВК
Аравинт Кумар Джаябалан и др. Proc Natl Acad Sci U S A. 2021 .
Бесплатная статья ЧВК
. 2021 9 февраля; 118 (6): e2021719118.
doi: 10.1073/pnas.2021719118.
Авторы
Аравинт Кумар Джаябалан ¹ , Шриватсан Адиварахан ² , Аакаш Коппула ³ , Рэйчи Абрахам ⁴ , Мона Батиш ^{3
5} , Даниэль Зенклузен ² , Дайан Э. Гриффин ⁴ , Энтони К.Л. Леунг ^{6
7
8}
Принадлежности
¹ Кафедра биохимии и молекулярной биологии, Школа общественного здравоохранения Блумберга, Университет Джона Хопкинса, Балтимор, Мэриленд, 21205.
² Департамент биохимии и молекулярной медицины, Университет Монреаля, Монреаль, QC h4T 1J4, Канада.
³ Факультет биологических наук, Делавэрский университет, Ньюарк, Делавэр, DE 19716.
⁴ W. Harry Feinstone Кафедра молекулярной микробиологии и иммунологии, Школа общественного здравоохранения Bloomberg, Университет Джона Хопкинса, Балтимор, MD 21205.
⁵ Кафедра медицинских и молекулярных наук, Делавэрский университет, Ньюарк, Делавэр, DE 19716.
⁶ Кафедра биохимии и молекулярной биологии, Школа общественного здравоохранения Блумберга, Университет Джона Хопкинса, Балтимор, Мэриленд, 21205; anthony. [email protected].
⁷ Кафедра молекулярной биологии и генетики, Медицинский факультет Университета Джона Хопкинса, Балтимор, Мэриленд, 21205.
⁸ Кафедра онкологии, Медицинский факультет, Университет Джона Хопкинса, Балтимор, Мэриленд 21205.
PMID: 33547245
PMCID: PMC8017970
DOI: 10.1073/пнас.2021719118
Абстрактный
Хотя биомолекулярные конденсаты стали важным биологическим явлением, механизмы, регулирующие их состав, и способы, которыми вирусы захватывают эти механизмы, остаются неясными. Альфавирусы, переносимые комарами, вызывают целый ряд заболеваний, от сыпи и артрита до энцефалита, при этом отсутствуют лицензированные лекарства для лечения или вакцины для профилактики. Неструктурный белок 3 фактора вирулентности альфавируса (nsP3) подавляет образование стрессовых гранул (SG) — класса цитоплазматических конденсатов, обогащенных факторами инициации трансляции и образующихся на ранней стадии инфекции. nsP3 имеет консервативный N-концевой макродомен, который гидролизует АДФ-рибозу из АДФ-рибозилированных белков, и С-концевой гипервариабельный домен, который связывает основной компонент SG G3BP1. Здесь мы показываем, что активность макродоменной гидролазы снижает АДФ-рибозилирование G3BP1, разбирает индуцированные вирусом SG и подавляет образование SG. Экспрессия nsP3 приводит к образованию отдельного класса конденсатов, в которых отсутствуют факторы инициации трансляции, но которые содержат G3BP1 и другие SG-ассоциированные РНК-связывающие белки. Экспрессия дефицитного по АДФ-рибозилгидролазе nsP3 приводит к образованию конденсатов, которые сохраняют факторы инициации трансляции, а также РНК-связывающие белки, сходные с SG. Таким образом, наши данные показывают, что АДФ-рибозилирование контролирует состав биомолекулярных конденсатов, особенно локализацию факторов инициации трансляции, во время инфекции альфавирусом.
Ключевые слова: АДФ-рибозилирование; альфавирус; биомолекулярные конденсаты; макродомен; стрессовые гранулы.
Заявление о конфликте интересов
Авторы заявляют об отсутствии конкурирующих интересов.
Цифры

Рис. 1.

Два различных класса биомолекулярных…

Рис. 1.

При инфицировании альфавирусом образуются два различных класса биомолекулярных конденсатов. ( А )…
Рисунок 1.
При инфицировании альфавирусом образуются два различных класса биомолекулярных конденсатов. ( A ) Клетки U2OS, стабильно экспрессирующие GFP-eIF3g, были инфицированы вирусом WT CHIKV ^mCherry при MOI 10, подвергались визуализации живых клеток с интервалом времени 12 минут в течение 14 часов. Показанные изображения представляют собой снимки различных стадий заражения. ( B ) Клетки U2OS были либо ложно инфицированы, либо инфицированы CHIKV. Через двенадцать часов после инфицирования клетки лизировали и блоттировали против указанных антител. ( C ) Скрипичный график показывает распределение временных точек (минут), представляющих появление, исчезновение SG и появление конденсата nsP3. Были включены 97 клеток из трех независимых экспериментов, и в каждой клетке были измерены моменты времени появления/исчезновения СГ и появления конденсатов nsP3. Столбики погрешностей соответствуют SD. ( D ) Клетки U2OS инфицировали CHIKV WT при множественности заражения 1. Через 6 ч после заражения (hpi) клетки фиксировали и иммуноокрашивали на nsP3 и определяли белки SG. ( E ) Клетки U2OS, трансфицированные GFP-меченым nsP3 ^WT, либо не подвергали стрессу, либо обрабатывали 100 мкг/мл циклогексимида (CHX), 0,2 мМ арсенита отдельно (ARS), либо совместно обрабатывали 0,2 мМ арсенита и 100 мкг/мл циклогексимид (ARS+CHX) в течение 30 мин. Затем клетки фиксировали и иммуноокрашивали на G3BP1 (красный) и eIF3b (синий). Звездочки указывают на нетрансфицированные клетки. ( F ) Гистограмма показывает процент GFP-положительных клеток с SG из трех независимых экспериментов. Столбики погрешностей соответствуют среднему значению ± стандартное отклонение. (Шкала, 10 мкм.)

Рис. 2.

Макродомен nsP3 подавляет образование СГ. …

Рис. 2.

Макродомен nsP3 подавляет образование СГ. ( A ) Схематическое изображение nsP3…
Рис. 2. Макродомен
nsP3 подавляет образование СГ. ( A ) Схематическое представление архитектуры домена nsP3. Клетки U2OS, трансфицированные GFP-мечеными nsP3 ^MD, nsP3 ^ZBD или nsP3 ^HVD, либо обрабатывали 0,2 мМ арсенита отдельно, либо совместно обрабатывали 100 мкг/мл циклогексимида в течение 30 мин. Затем клетки обрабатывали и иммуноокрашивали на маркеры SG G3BP1 (красный) и eIF3b (синий). Звездочки указывают на нетрансфицированные клетки. ( B ) Гистограмма показывает процент GFP-позитивных клеток с SG. *** P < 0,005, двусторонний, непарный критерий Стьюдента t . Столбики погрешностей соответствуют среднему значению ± стандартное отклонение для трех независимых экспериментов. ( C ) Клетки U2OS, трансфицированные вектором GFP, меченым GFP nsP3 ^WT или nsP3 ^AGDA, обрабатывали 0,2 мМ арсенита в течение 30 минут и подвергали иммуноокрашиванию на G3BP1 (красный) и eIF3b (синий). Звездочки указывают на нетрансфицированные клетки. ( Д ) Гистограмма показывает процент GFP-положительных клеток с SG. * P < 0,05, *** P < 0,001, двусторонний, непарный тест Стьюдента t . Планки погрешностей соответствуют среднему значению ± стандартное отклонение с n = 3. (Шкала шкалы, 10 мкм.)

Рис. 3.

АДФ-рибозилгидролазная активность nsP3 подавляет…

Рис. 3.

АДФ-рибозилгидролазная активность nsP3 подавляет образование SG. ( A ) Клетки U2OS трансфицированы…
Рис. 3.
АДФ-рибозилгидролазная активность nsP3 подавляет образование SG. ( A ) Клетки U2OS, трансфицированные GFP-меченым nsP3 ^WT или другими точечными мутантами nsP3 (D10A, G32E, G32S, G112E и Y114A), обрабатывали 0,2 мМ арсенита в течение 30 минут и подвергали иммуноокрашиванию на G3BP1 (красный) и eIF3b (синий). Звездочки указывают на нетрансфицированные клетки. ( 9Клетки 0368 B ) 293F трансфицировали либо вектором GFP, либо меченым GFP nsP3 ^WT, nsP3 ^G32E, nsP3 ^G32S или nsP3 ^Y114A. После 24-часовой трансфекции клетки осаждали, лизировали, иммунопреципитировали с использованием антител к GFP и проводили блоттинг иммунопреципитатов против антител G3BP1 и GFP. ( C ) Гистограмма показывает процент GFP-позитивных клеток с SG в A . ( Нижний ) Связывание АДФ-рибозы и гидролазная активность протестированных мутантов (31). ** P < 0,01, двусторонний, непарный тест Стьюдента t . Столбики погрешностей соответствуют среднему значению ± стандартное отклонение с n = 3. ( D ) Клетки, трансфицированные GFP-мечеными nsP3 ^WT или nsP3 ^G32E, совместно обрабатывали 0,2 мМ арсенита и 100 мкг/мл циклогексимида для получения 3O-мин. Затем клетки подвергали иммуноокрашиванию на G3BP1 (красный) и eIF3b (синий). Звездочки указывают на нетрансфицированные клетки. ( E ) В таблице обобщена колокализация nsP3 (WT или G32E) с различными белками, связывающими мРНК, и факторами трансляции, как показано на Приложение SI , рис. S3 A . ( F ) Микроскопия со сверхвысоким разрешением показывает, как распределение сигнала поли(А)+ мРНК перекрывается с мутантным nsP3 WT или G32E. Клетки U2OS, трансфицированные меченым GFP nsP3 ^WT или nsP3 ^G32E, обрабатывали 0,2 мМ арсенита в течение 30 минут и гибридизовали с олиго(dT) зондами с последующим окрашиванием на GFP. Зеленые и красные прямоугольники обозначают конденсаты из nsP3-трансфицированных и нетрансфицированных клеток соответственно. (Шкала баров, 10 мкм.)

Рис. 4.

Дифференциальная способность связывания PAR и АДФ-рибозилирование…

Рис. 4.

Дифференциальная ФАР-связывающая способность и АДФ-рибозилирование компонентов СГ. ( A ) 293F ячейки…
Рис. 4.
Дифференциальная ФАР-связывающая способность и АДФ-рибозилирование компонентов СГ. ( 9Клетки 0368 A ) 293F трансфицировали либо вектором GFP, либо меченными GFP G3BP1, G3BP2, eIF3d, eIF3g или eIF3i в течение 36 часов. Затем клетки осаждали, лизировали и инкубировали со 100 пмоль биотина-PAR и гранулами стрептавидина. Затем пулдаун стрептавидина блоттировали антителами против GFP. ( B ) Клетки 293F, трансфицированные либо вектором GFP, либо мечеными GFP G3BP1, G3BP2, eIF3d, eIF3g или eIF3i в течение 36 часов. Затем клетки осаждали, лизировали и подвергали иммунопреципитации с использованием антител против GFP. Затем иммунопреципитаты блоттировали реагентом pan-ADPr.

Рис. 5.

nsP3 снижает АДФ-рибозилирование…

Рис. 5.

nsP3 снижает АДФ-рибозилирование основного компонента SG G3BP1. ( А ) 293F…
Рис. 5.
nsP3 снижает АДФ-рибозилирование основного компонента SG G3BP1. ( 9Клетки 0368 A) 293F трансфицировали либо GFP, G3BP1, меченым GFP, либо котрансфицировали G3BP1, меченым GFP, с возрастающей концентрацией меченного FLAG nsP3 ^WT. После 24-часовой трансфекции клетки осаждали, лизировали, иммунопреципитировали с использованием антител против GFP и иммуноблоттировали с реагентом pan-ADPr. ( B ) Клетки 293F трансфицировали GFP, G3BP1, меченным GFP отдельно, или котрансфицировали G3BP1, меченым GFP, либо с меченым FLAG nsP3 ^WT, либо с nsP3 ^G32E . Через 24 часа после трансфекции клетки осаждали, лизировали, подвергали иммунопреципитации с использованием антител против GFP и иммуноблотингу с реагентом pan-ADPr. ( C ) Клетки 293F, трансфицированные G3BP1, меченным GFP, лизировали и подвергали иммунопреципитации с использованием антител против GFP. Иммунопреципитаты разделяли на две половины и инкубировали либо с буфером, либо с 5 мкг ЧИКВ МД в течение 1 ч при 37 °С. После инкубации шарики промывали и промокали реагентом pan-ADPr. ( D ) Схематическое изображение доменной структуры G3BP1. ( E – G ) Клетки с двойным нокаутом (dKO) U2OS G3BP1/2 трансфицировали либо вектором GFP, либо конструкциями G3BP1, меченными GFP, в течение 36 часов. ( E ) Затем клетки либо лизировали, иммунопреципитировали с использованием антител против GFP и блоттировали реагентом pan-ADPr (звездочки обозначают тяжелую и легкую цепи), либо ( F ) пермеабилизировали, фиксировали и иммуноокрашивали для PABP (красный) и eIF3b (синий). Звездочки указывают на нетрансфицированные клетки. ( G ) Гистограмма показывает процент GFP-позитивных клеток с SG. нс, незначащий, двусторонний, непарный Стьюдента т тест. Столбики погрешностей соответствуют среднему значению ± стандартное отклонение с n = 3. ( H и I ) Клетки U2OS G3BP1/2 dKO котрансфицировали в двух комбинациях: 1) FLAG-вектор с G3BP1 или G3BP1-меченым ∆1– 168, и 2) nsP3 с маркировкой FLAG с G3BP1 или G3BP1 с меткой GFP ∆1–168. Через 36 ч после трансфекции клетки фиксировали и окрашивали на FLAG (красный) и eIF3b (синий). Звездочки указывают на нетрансфицированные клетки. Гистограмма показывает процент GFP-положительных клеток с SG. *** Р < 0,001, **** P < 0,0001, двусторонний, непарный тест Стьюдента t . Планки погрешностей соответствуют среднему значению ± стандартное отклонение с n = 3. (Шкала шкалы, 10 мкм.)

Рис. 6.

АДФ-рибозилгидролазная активность nsP3 подавляет…

Рис. 6.

АДФ-рибозилгидролазная активность nsP3 подавляет образование СГ при альфавирусной инфекции. ( А )…
Рис. 6.
АДФ-рибозилгидролазная активность nsP3 подавляет образование SG при альфавирусной инфекции. ( A ) Титры вируса WT и мутанта Y114A в клетках NSC34 (31) и U2OS проанализированы при 24 hpi. Данные представлены в виде единиц образования бляшек (БОЕ)/мл ± SEM. ( B ) Клетки 293T, трансфицированные вектором GFP или GFP-G3BP1 в течение 12 часов, были либо ложно инфицированы, либо инфицированы CHIKV ^WT или CHIKV ^Y114A при МВД 1 в течение 24 часов. При 24 HPI клетки лизировали, иммунопреципитировали с использованием антител против GFP и блоттировали реагентом pan-ADPr. ( C и D ) Клетки U2OS инфицировали либо CHIKV ^WT, либо CHIKV ^Y114A при множественности заражения 1. При 5,5 hpi клетки обрабатывали 0,2 мМ арсенита в течение 30 минут и окрашивали иммуноокрашиванием на nsP3 (зеленый) , G3BP1 (красный) и eIF3b (синий). Звездочки указывают на нетрансфицированные клетки. Гистограмма показывает процент инфицированных вирусом клеток (nsP3-позитивных) с SG. ** P < 0,01, двусторонний, непарный тест Стьюдента t . Столбики погрешностей соответствуют среднему значению ± стандартное отклонение с n = 3. ( E ) Клетки U2OS были инфицированы либо CHIKV ^WT, либо CHIKV ^Y114A при MOI 5. При 7,5 HPI клетки обрабатывали 0,2 мМ арсенита. в течение 30 мин. Затем обработанные клетки фиксировали и гибридизовали с зондами вРНК (красные) с последующим иммуноокрашиванием на G3BP1 (зеленый) и eIF3b (синий). Звездочки указывают на нетрансфицированные клетки. ( Ф ) Прямоугольная диаграмма показывает процент клеток с вРНК , совместно локализованных с eIF3b / G3BP1 , на рис . 6 E и SI Приложение , рис. S5 E . Около 20 клеток из каждой временной точки были количественно определены для колокализации. * P < 0,05, нс, недостоверный, двусторонний, непарный критерий Стьюдента t . (Шкала, 10 мкм.)

Рис. 7.

АДФ-рибозилгидролазная активность nsP3 регулирует…

Рис. 7.

АДФ-рибозилгидролазная активность nsP3 регулирует разборку SG. ( A ) Схематическое изображение…
Рис. 7.
АДФ-рибозилгидролазная активность nsP3 регулирует разборку SG. ( A ) Схематическое изображение экспериментальной установки для визуализации живых клеток. ( B и C ) Клетки U2OS, стабильно экспрессирующие GFP-eIF3g, были инфицированы WT или Y114A CHIKV ^mCherry с MOI 10 и подвергали визуализации живых клеток с интервалом времени 12 минут в течение 14 часов. Показанные изображения представляют собой моменты времени, когда SG не наблюдались (t = -12 мин), за которыми следует момент времени, когда наблюдались SG (t = 0 ч). Белые стрелки указывают на СГ. (Масштабная линейка, 10 мкм.) Скрипичный график показывает распределение среднего времени пребывания SG (минуты) в клетках, инфицированных WT и Y114A CHIKV ^mCherry . *** P < 0,001, двусторонний, непарный Стьюдента т тест. WT ( n = 51) и Y114A ( n = 77) инфицированные клетки из трех независимых экспериментов были включены для измерения времени пребывания SG. Столбики погрешностей соответствуют SD. ( D ) Модель сборки и разборки SG, индуцированной вирусной инфекцией, регулируемой активностью nsP3 ADP-рибозилгидролазы.
См. это изображение и информацию об авторских правах в PMC
Похожие статьи
Провирусная и противовирусная роль РНК-связывающего белка G3BP1.
Джаябалан А.К., Гриффин Д.Э., Леунг А.К.Л. Джаябалан А.К. и др. Вирусы. 2023 6 февраля; 15 (2): 449. дои: 10.3390/v15020449. Вирусы. 2023. PMID: 36851663 Бесплатная статья ЧВК. Обзор.
Роль Chikungunya nsP3 в регуляции активности G3BP1, формировании стрессовых гранул и эффективности лекарств.
Лу Х, Алам У, Уиллис С, Кеннеди Д. Лу X и др. Арх Мед Рез. 2021 Январь; 52(1):48-57. doi: 10.1016/j.arcmed.2020.10.002. Epub 2020 31 октября. Арх Мед Рез. 2021. PMID: 33131924
Компоненты стрессовых гранул G3BP1 и G3BP2 играют провирусную роль на ранней стадии репликации вируса чикунгунья.
Шольте Ф.Е., Тас А., Албулеску И.С., Жусинайте Э. , Меритс А., Снайдер Э.Дж., ван Хемерт М.Дж. Шольте Ф.Е. и соавт. Дж Вирол. 2015 апр;89(8):4457-69. doi: 10.1128/ОВИ.03612-14. Epub 2015 4 февраля. Дж Вирол. 2015. PMID: 25653451 Бесплатная статья ЧВК.
Отдельные домены G3BP способствуют эффективной кластеризации комплексов репликации альфавируса и привлечению механизма инициации трансляции.
Гётте Б., Панас М.Д., Хеллстрём К., Лю Л., Самрин Б., Ларссон О., Ахола Т., Макинерни Г.М. Гётте Б. и др. PLoS Патог. 201914 июня; 15 (6): e1007842. doi: 10.1371/journal.ppat.1007842. Электронная коллекция 2019 июнь. PLoS Патог. 2019. PMID: 31199850 Бесплатная статья ЧВК.
Прогресс исследований структуры и функции G3BP.
Кан В, Ван И, Ян В, Чжан Дж, Чжэн Х, Ли Д. Канг В. и др. Фронт Иммунол. 2021 30 авг;12:718548. doi: 10.3389/fimmu.2021.718548. Электронная коллекция 2021. Фронт Иммунол. 2021. PMID: 34526993 Бесплатная статья ЧВК. Обзор.
Посмотреть все похожие статьи
Цитируется
Провирусная и противовирусная роль РНК-связывающего белка G3BP1.
Джаябалан А.К., Гриффин Д.Э., Леунг А.К.Л. Джаябалан А.К. и др. Вирусы. 2023 6 февраля; 15 (2): 449. дои: 10.3390/v15020449. Вирусы. 2023. PMID: 36851663 Бесплатная статья ЧВК. Обзор.
Идентификация белков комаров, которые по-разному взаимодействуют с неструктурным белком 3 альфавируса, определяющим специфичность вектора.
Байерс Н.М., Бернс П.Л., Стучлик О., Рид М.С., Ледерманн Д.П., Пол Дж., Пауэрс А.М. Байерс Н.М. и соавт. PLoS Negl Trop Dis. 2023 25 января; 17 (1): e0011028. doi: 10.1371/journal.pntd.0011028. Электронная коллекция 2023 янв. PLoS Negl Trop Dis. 2023. PMID: 36696390 Бесплатная статья ЧВК.
Роль макродомена nsP3, зависящая от типа клеток, для связывания АДФ-рибозы и активности гидролазы при заражении вирусом чикунгунья.
Ким Т., Абрахам Р., Питерс Л., Йе Дж. Х., Гриффин Д. Э. Ким Т и др. Вирусы. 2022 9 декабря; 14 (12): 2744. дои: 10.3390/v14122744. Вирусы. 2022. PMID: 36560748 Бесплатная статья ЧВК.
Отдельная фаза? Поли(АДФ-рибоза) против РНК в организации биомолекулярных конденсатов.