Программа зайцева: Методика Зайцева — обучение детей чтению при помощи кубиков Зайцева

Содержание

Методика Зайцева — полезные советы от VIKILAND

Известный педагог Николай Зайцев сделал интересное открытие в результате своих наблюдений за поведением и игрой малышей. Его основная мысль заключается в следующем — вы никогда не услышите, как дети будут произносить буквы по отдельности, чтобы потом уже соединить их в слоги.

По мнению педагога, классический метод обучения чтению действует по определённому принципу. Цельная речь делится на элементы — буквы. Зайцев отмечает, что эта методика уже устарела и оказывает отрицательное влияние на развитие речи младенцев, закрепощает их связь с родным языком.

Учебный план Николая Зайцева подойдёт для детей от трёх лет и старше. По мнению автора, следует отказаться от классической методики, как устаревшей и мало эффективной. И перейти к новым методам обучения. Которые гораздо эффективнее и удобнее в освоении.

Преимущество этого пособия («кубики Зайцева») в том, что оно основано на простой игре. А игра, как известно — является основной деятельностью детей.

В кубики Зайцева малыши охотно играют как сами, так и с родителями и друзьями.

Николай Зайцев взял за основу не «стандартный слог», а «склад».

Стоит отметить, что в программе нет части, посвящённой изучению букв, так как дети по системе Зайцева работают со складами. Склад — это пара гласной/согласной и другие подобные вариации. Эти пары располагаются на гранях кубика, и ребёнок сам начинает составлять специально подобранные слова.

Кубики не похожи друг на друга. Часто они изготавливаются из дерева или железа. Имеют разный цвет, размер. Даже издают звуки. Это разнообразие призвано помочь детям быстрее освоиться с гласными и согласными звуками. Дети старше трёх лет — учатся читать буквально с первых занятий. Малыши (от года) начинают говорить и читать одновременно.

Для того чтобы освоить слоги — предлагается активное взаимодействие с ними (слушать, пропевать слоги) и использование кубиков Зайцева.

Елена Данилова — специалист в раннем развитии детей — внесла ряд изменений в методику Зайцева, адаптировав её для использования с детьми от полутора лет.

Преимущества инновационной методики Николая Зайцева

пособия Зайцева составлены таким образом, чтобы ребёнок был застрахован он элементарных грамматических ошибок и не делал их в будущем;

используя кубики Зайцева можно начинать учиться читать уже с полугодовалого возраста. Система открыта и для детей пяти лет. Методика обладает универсальным характером;

в случае если дети не успевают схватывать школьную программу, система педагога — поможет им наверстать упущенные знания;

играя, ребёнок на начальном этапе работает со складами. Он учит сочетания букв, что намного эффективнее. Так как исчезает необходимость учиться произносить отдельные буквы вместе, например Г и А. Тем самым малыш меньше запинается. Почти не делает ошибок и быстрее начинает читать самостоятельно.

Недостатки методики Зайцева

главная претензия к системе состоит в том что, читая «по Зайцеву» — очень часто дети просто проглатывают слоги и окончания. У них возникают проблемы с составом слова. Ведь они знают только склады Зайцева;

трудности в переучивании первоклассников, занимавшихся по программе педагога. У школьников начинаются проблемы с фонетическим разбором слова, дети совершают много ошибок, из-за кардинальных различий в обучении Николая Зайцева от традиционной системы;

цена инновационной методики — довольно высока. Купить кубику могут только семьи со средним уровнем достатка и выше;

само пособие, после покупки ещё надо собрать и склеить. А это займёт немало времени и сил родителей.

Вернуться к списку
Методики Зайцева
Наш сайт посвящен обучению детей 4-5 лет чтению и математике по уникальным методикам Николая Александровича Зайцева. Это всемирно известные КУБИКИ ЗАЙЦЕВА и СТОСЧЁТ.

Вы познакомитесь с технологией, практическим опытом работы, творческим применением методик Зайцева в детском саду и семье.
Обучение малышей по эффективной технологии Зайцева может проводиться в центрах раннего развития, в детских садах, в рамках оказания дополнительных образовательных услуг, т.как не дублируется основная образовательная программа детского сада. Согласуется с ФГОС. Многие воспитатели, оказывая гувернерские и репетиторские услуги, успешно пользуются пособиями Зайцева.
Одно из преимуществ системы Зайцева перед другими методиками раннего развития  – она легко применима в домашних условиях. Всё прописано по шагам. Любая мама сможет сама обучать своего ребенка, сохранив время и семейный бюджет.
Основная идея методики Зайцева: обучение должно опираться на все формы восприятия ребенка, мышление, активную практическую и самостоятельную деятельность, развивать слух и зрительную память.

Роль наставника — помочь ребенку, играя, весело, без утомительного сидения за партой, научиться читать и считать.
Результаты обучения по Зайцеву можно увидеть очень быстро, даже при крошечных затратах времени в день. И главное, работа со «Стосчетом» и кубиками позволяет сделать математику, чтение и письмо любимыми для детей.
Распространение и внедрение методик Зайцева убедительно доказало их высокую технологичность и эффективность.
Кубики Зайцева
«Стосчет»
«Кубики Зайцева» — пособие для раннего обучения чтению, хорошо продуманная система.
Принципиальное отличие методики обучения чтению Н.А.Зайцева от традиционных методик в том, что ребенок учится читать, не составляя слова из отдельных букв, и не по слогам, а по складам. Именно складовой метод обучения рекомендовал ещё Л.Н.Толстой, положив его в основу своей «Азбуки». Но безусловным прорывом является то, что зайцевские кубики — звучащие! Кубики различаются по цвету, объёму, весу,звуку, что обеспечивает непроизвольное, быстрое, надёжное запоминание.
Система таблиц создает информационное поле предмета, рассчитанное на быстрое в него погружение и использование при решении многочисленных и разнообразных задач.
Столбики и строчки таблиц, алфавит, под аккомпанемент баяна и балалайки, распеваются на популярные мелодии.
Как показывает широчайшая апробация, через 15-20 часовых занятий дети четырех-пяти лет начинают читать. В дальнейшем идет работа по укреплению навыков чтения и письма.
Результаты, сопровождающие процесс выхода в чтение: речь становится чище и отчётливей, благодаря постоянному проговариванию и пропеванию складов, быстро расширяется словарный запас, появляются навыки грамотного письма.Пособие может использоваться при обучении детей и взрослых, для которых русский язык не является родным.

Первые «Кубики Зайцева» выпущены в 1989г.
Обучаясь математике по системе Зайцева, дети с 4 лет легко усваивают числа в пределах 100, их состав, порядок, действия сложения и вычитания двухзначных чисел!
Суть математики по Зайцеву состоит в том, что ребёнку предлагают увидеть сразу все числа от 0 до 99, то есть всю сотню сразу. Причём всё это представлено в виде стройной системы. Ребёнок видит, сколько десятков и единиц составляет каждое число, начинает предметно ощущать количество, может соотнести его с абстрактным значком цифры. Малыши хорошо усваивают зрительный и звуковой образы числа в пределах сотни, запоминают порядковое расположение чисел и умеют свободно ориентироваться в числовой ленте;
Таблицы Н.А.Зайцева помогают увидеть разницу между большим и меньшим числом, как увеличиваются и уменьшаются числа, что при этом меняется. Сложение и вычитание чисел, которые выполняет ребенок, производятся не в уме, а с опорой на наглядность, на непосредственные действия с материалом. Практические действия не остаются неизменными. Постепенно дети «перерастают» «Стосчет», совершают арифметические действия на основе абстрактного мышления.
В старшем дошкольном возрасте ведется отработка навыков до автоматизма, и дети начинают складывать и вычитать числа в пределах сотни, решать задачи, совершенствуя вычислительные навыки.
Первый «Стосчёт» выпущен в 1990г.
Подробно о методике
Подробно о методике

Заказать интерактивные кубики Зайцева

Заказать «Стосчёт»
видео:
Как работать с кубиками Зайцева
видео:
Как работать по методике «Стосчёт»
Методики Н. А. Зайцева — здоровьесберегающие технологии
Физиологи и офтальмологи отмечают, что методики Зайцева безупречны с точки зрения охраны здоровья ребенка.
В процессе обучения дети не находятся в постоянном статичном состоянии за столами, а перемещаются по комнате: меняется вид и место деятельности, исключается монотонность, длительное пребывание в сидячем положении. Это не позволяет детям утомляться. Они могут ходить, стоять, лежать на ковре, Не портится осанка и зрение, потому что дети смотрят на большие таблицы и карточки. Зрение и осанка часто даже улучшаются.
Так играем или учим? Конечно же, играем, часто соревнуемся один на один с партнером или в команде. В дошкольном возрасте любой другой путь ведет в тупик.

Методическая система Зайцева, будучи глубоко природосообразной, является основой формирования благоприятной среды развития и образования детей.

Инклюзивное образование и методики Зайцева
Методика даёт хорошие результаты в работе с детьми, имеющими диагнозы ЗПР, ОНР, ММД, алалия, аутизм, а также со слабовидящими, слабослышащими и глухими. Такая универсальность заложена в самом принципе обучения, так как он позволяет формировать межанализаторные и межполушарные связи, реализует интегративную функцию мозга и, опираясь на сохранные функции, максимально задействует возможности ребенка. Даже дети с несформировавшимся доминантным полушарием оказываются полностью включенными в работу, поскольку система Зайцева предполагает опору на все основные каналы восприятия. Другими словами, методика Зайцева реализует компенсаторный подход к обучению, что является обязательным условием работы логопеда и дефектолога.
Методики Н. Зайцева характеризуются специалистами (физиологами, медиками, психологами) как здоровьесберегающие и универсально-адаптивные, учитывающие индивидуальные особенности различных групп детей, в том числе и с особенностями психофизического развития.

В настоящее время для детей дошкольного и школьного возраста ООО Методики Н. Зайцева выпускает большое количество разнообразных пособий по обучению чтению, каллиграфии, математике, грамматике русского языка, английскому языку по методикам Н. Зайцева.
Оформить заказ >>>
Программа «Кубики Зайцева»
В основу положено обучение дошкольников по методике Н.А.Зайцева.
В своей методике Николай Зайцев предлагает альтернативу слогам – использует склады. У него – это основная единица языка. Складом может быть одна буква, сочетание гласной и согласной, согласной и твердого знака, согласной и твердого знака. Такой принцип чтения – складовой – является основой методики Зайцева. Такая методика очень похожа с букварем Федота Кузьмичева, XIX век, и азбукой Л.Толстого. В этих книгах тоже был использован принцип обучения по складам.
Склад можно определить, приложив руку ниже подбородка и произнеся слово. То усилие мускулов, которое вы почувствуете рукой и будет являться складом.
Склады по его методу располагаются на кубиках и в таблицах. Он использовал в помощь обучению зрение, слух и тактильные ощущения, т.к. аналитическое мышление. Расположив склады на кубиках, Зайцев сделал их отличающимися по цвету, звучанию, размеру. С помощью этого, когда ребенок берет кубики, задействуются различные каналы восприятия.
Создатель методики не предполагает авторитарного стиля общения педагога с детьми. Он говорит о том, что надо учитывать индивидуальные особенности и темп развития каждого ребенка.
Занятия построены на совместной деятельности ребѐнка и взрослого, проводятся с группой детей, не превышающей 8-10 человек с использованием таблиц и кубиков Н.А.Зайцева.
Кубики могут различаться по размеру.
На кубиках большого размера изображены склады с твердым звучанием.
На кубиках маленького размера – с мягким звучанием.
Они могут быть одинарными и двойными.
На сдвоенных кубиках расположены согласные, сочетающиеся не со всеми гласными (жа-жу-жи).
Звонкость склада указывается металлом, глухость – деревом.
Золото – гласные.
Твердый знак изображен на железно-деревянных кубиках,
мягкий – на деревянно-золотых.
На кубике белого цвета располагаются знаки препинания.
Цветовой подбор для букв отличается от школьного.
Здесь для обозначения гласных используется голубой цвет, синим обозначены согласные, а твердый и мягкий знаки – зеленым.
Такое отличие от школьных синих, красных и зеленых цветов, по мнению Зайцева, помогает детям начать читать бегло.
Знакомство начинающих учиться читать поначалу происходит только с кубиками, позже они знакомятся с таблицами.
Таблицы развешаны довольно высоко. Это способствует профилактике сколиоза и нарушений зрения.
Курс связан с несколькими направлениями образовательной деятельности: познавательное, речевое и социально-коммуникативное развитие. Структурно занятия разделяются на несколько этапов.
В зависимости от содержания занятий и форм организации образовательного процесса на различные этапы отводится определѐнное количество времени. На некоторых занятиях работа с кубиками и таблицами может проводится параллельно с изучением темы по окружающему миру, т.е. в течение всего занятия. При дифференциации заданий может быть использована индивидуальная или групповая форма работы с детьми по формированию и развитию навыка чтения.
Самая большая проблема при обучению детей чтению возникает тогда, когда ребенок все буквы знает, а читать не может… Не может «слить» согласный звук и гласный! При обучению по кубикам Зайцева такой ситуации не возникает – ребенок сразу знакомится со складами, пропевает их по таблицам, кубикам: БУ-БО-БА-БЭ-БЫ-Б; бю- бе-бя-бе-би-бь. А сложить слово из складов намного проще чем из букв. Если ребенок заучил как буква звучит в алфавите или еще хуже какой картиночке соответствует ему трудно прочитать слово: МА-МА должно соответствовать набору картинок: мяч-арбуз-мяч-арбуз, или озвученных букв: эм-а-эм-а. Азбуки с картинками не помогают, а мешают научиться читать. Изображения букв увязываются в сознании ребенка с картинками, от которых потом приходится освобождаться.
Пропевание склада в игре, соревновании приводит к устойчивому запоминанию, все склады на таблице находятся в строгой системе: вверху «железные»-внизу, «деревянные» (звонкие-глухие согласные), сверху вниз можно проследить соответствие парных, сонорных и др. согласных (з-с, ж-ш, в-ф, г-к и т.д.). Ритмическое проговаривание, пропевание, музыкальное сопровождение являются мощными средствами воздействия на память.
Гласные, согласные, звонкие, глухие, твердые, мягкие – категории для детей абстрактные и совершенно непонятные. Не нужны им пока ни термины, ни, тем более, далекие от науки определения и пояснения (из современных школьных учебников). Конечно, нужно уметь отличать гласные от согласных, звонкие от глухих, твердые от мягких, но почему обязательно только через термины и определения? В так называемых «твердых» и «мягких» ничего твердого и мягкого нет, а вот большое и маленькое ощутимо присутствует.

Методики Зайцева для развития детей дошкольного возраста
Доступность методических материалов и пособий
Дидактические принципы, приемы, способы работы подробно излагаются в методическом руководстве к каждому пособию, содержат массу упражнений, игр, примеров, практического материала, необходимого педагогам и облегчающего их работу.
Методики сопровождаются аудио — видеоматериалами и видео-курсами.
Свидетельством доступности методик являются постоянно увеличивающиеся тиражи пособий. Многие воспитатели, учителя, в том числе оказывающие гувернерские и репетиторские услуги, и даже родители успешно пользуются всеми пособиями без предварительного обучения под руководством специалистов.
Косвенным подтверждением популярности методик является то, что пособия, аналогичные Кубикам Зайцева, разработаны (с участием автора) и успешно используются при обучении детей и взрослых чтению на других языках.
Охрана здоровья, развитие психофизических характеристик учащихся
Характерной чертой, отмечается учеными, педагогами, специалистами, является отсутствие перегрузок, ослаблений зрения и осанки, столь характерных для большинства современных методик. Занятия проводятся в игровой и соревновательной форме, с пропеванием учебных материалов (обеспеченных аудиозаписью), в движении, исключается монотонность, длительное пребывание учащихся в сидячем положении и связанные с этим школьные стрессы. Методическое обеспечение позволяет проводить занятия на воздухе.
Зрение и осанка часто даже улучшаются.
Раннее обучение чтению и счету по методикам Зайцева Н.А. — надежнейшее средство диагностики. Дети ярко проявляются в деятельности, через несколько занятий любому педагогу без специальных тестов ясно, кто есть кто. Определяются как талантливые, чрезвычайно способные к обучению дети — быстрые, так и медленные, требующие особого внимания, а некоторые даже специального обследования. Чем раньше мы это выявим, тем больше будет шансов их выправить.
Более подробно о методике Зайцева Вы можете узнать на официальном сайте автора методики — Николая Зайцева — http://www.metodikinz.ru/
==>> Ознакомиться с другими методиками раннего развития детей
Школа Гениальности
Николай Александрович Зайцев
Зайцев Николай Александрович (1939) — известный российский автор знаменитого пособия «Кубики Зайцева» и многих других методик раннего развития детей.
Все его пособия, главным и наиболее известным из которых являются «Кубики Зайцева», основаны на естественной потребности любого ребенка в игре.
Суть методики в том ,что, весь материал подается в игровой форме. Методики Н. Зайцева характеризуются специалистами (физиологами, медиками, психологами) как природосообразные, здоровьесберегающие и универсально-адаптивные, учитывающие индивидуальные особенности различных групп детей, в том числе и с особенностями психофизического развития.
Пособия Н. Зайцева представляют собой комплекты учебных материалов по обучению чтению, каллиграфии, математике, грамматике русского языка, английскому языку.
В основе методик Н. Зайцева лежит неукоснительное соблюдение основных дидактических принципов:От общего к частному и от частного к общему.
От конкретно-образного через наглядно-действенное к словесно-логическому.
Обеспечение наглядности с использованием различных каналов восприятия.
Системная подача материала.
Алгоритмизация учебных действий.
Учет физиологии восприятия учебной информации.
Охрана здоровья учащихся.
С помощью таблиц-тренажёров у ребенка формируется точный образ-представление, раскрывающий сущность понятия или предмета. Таблицы выполняют роль многофункционального посредника между ребенком и взрослым: обучают, информируют, ориентируют в учебном материале, тренируют и формируют необходимые навыки.

Система таблиц создает информационное поле предмета, рассчитанное на быстрое в него погружение и использование при решении многочисленных и разнообразных задач и примеров. Каждая из них нужна при введении, осмыслении, закреплении и повторении материала, призвана напоминать о проделывавшейся ранее, с опорой на нее, работе. Появляются возможности для взаимообучения учащихся.
Кубики Николая Александровича Зайцева

Кубики Зайцева — это новая методика обучения детей чтению, основанная на чтении слова по складам (не путать со слогами). По мнению автора методики, таким способом можно научить детей читать с 2-3х летнего возраста. Складовой принцип чтения — основа Зайцевского метода обучения детей чтению. Склад — это пара из согласной с гласной, или из согласной с твердым или мягким знаком, или же одна буква. Пользуясь этими складами (каждый склад находится на отдельной грани кубика), ребенок начинает составлять слова. Кубики различаются по цвету, размеру, издают разные звуки. Они бывают железные и деревянные. Эти особенности помогают детям почувствовать разницу между гласными и согласными, звонкими и мягкими. Детям 3,5-4 лет методика дает возможность научится читать на первых же занятиях, а малышам от 1 года — начать говорить и читать одновременно. Для освоения слогов автор предлагает слушать, манипулировать слогами и петь их уже с детишками 3-4 лет, используя кубики с изображенными на них сочетаниями букв: «БА», «БЕ», «БИ» и так далее.
Эффективность

Как показывает широчайшая практика, через 15-20 часовых занятий дети четырех-пяти лет начинают читать, складывать и вычитать в пределах ста. В дальнейшем идет работа по укреплению навыков чтения, письма и счета.
К шести-семи годам, опять же при двух занятиях в неделю, не менее 80-90% детей способны учиться по нынешним программам для второго, третьего, четвертого классов.
По мнению психолингвистов, занятия с кубиками Зайцева особенно полезны для детей с доминантно развитым правым полушарием, для которых образное мышление является основным способом усвоения знаний. Пособие предполагает эмоциональное обучение, связанное с пением, что позволяет даже младшим дошкольникам, аналитическое мышление которых еще не вполне развилось, моментально ухватывать сущность процесса соединения складов в слово.
Эта методика позволяет также развить музыкальный слух и творческое мышление. Однако родителям, которые научили детей читать при помощи системы Зайцева, стоит в период подготовки к школе, дать будущему первокласснику хотя бы элементарные знания о фонемном составе слова. Это поможет малышу быстрее справиться с программой изучения русского языка и не испытывать сложности с выделением частей слова, которые часто возникают у тех учеников, которые видят в словах только склады.
Охрана здоровья, развитие психологических характеристик учащихся

Характерной чертой, отмечается учеными, педагогами, специалистами, является отсутствие перегрузок, ослаблений зрения и осанки, столь характерных для большинства современных методик. Занятия проводятся в игровой и соревновательной форме, с пропеванием учебных материалов (обеспеченных аудиозаписью), в движении, исключается монотонность, длительное пребывание учащихся в сидячем положении и связанные с этим школьные стрессы. Методическое обеспечение позволяет проводить занятия на воздухе.

Зрение и осанка часто даже улучшаются.
Раннее обучение чтению и счету по методикам Н.Зайцева — надежнейшее средство диагностики. Дети ярко проявляются в деятельности, через несколько занятий любому педагогу без специальных тестов ясно, кто есть кто. Определяются как талантливые, чрезвычайно способные к обучению дети — быстрые, так и медленные, требующие особого внимания, а некоторые даже специального обследования. Чем раньше это выявляется, тем больше будет шансов их выправить.

обучение по Зайцеву. Читайте на портале Ya-roditel.ru
Уникальная методика раннего развития по Зайцеву сегодня получила большую популярность. Одной из причин широко распространения данного метода является естественное детское стремление к игре. Именно игра ставится во главе методики петербургского педагога Николая Зайцева и позволяет в легкой и приятной для ребенка форме овладеть необходимыми навыками.
Цель методики раннего развития Зайцева
Данная методика лучше всего подходит для изучения иностранных языков, письма, основ математики, грамматики и логики. Дети легко овладевают нужными знаниями еще до начала обучения в школе.
Если процесс организован правильно, ребенок сразу начинается учиться и в дальнейшем будет способен усваивать достаточно большие объемы информации. Огромную роль играет детская любознательность, благодаря которой малыш получает от учебы удовольствие.
Как проводить занятия по методике Зайцева
Сущность методики Зайцева можно выразить простой фразой: «не учиться, а играть!». Весь учебный материал подается в игровой форме. Обучение ни в коем случае не нужно навязывать ребенку, в противном случае его интерес будет постепенно угасать, а со временем он начнет испытывать стойкое неприятие к процессу обучения в целом.
Во время учебы необходимо чаще переключать внимание детей с одних учебных материалов на другие, сохранять средний темп подачи материала. По мнению детских психологов спешка может привести к потере интереса к процессу обучения.
Стандартный урок по Зайцеву длится 25 минут. Детям не возбраняется сидеть, лежать и даже ходить. Отдельного внимания заслуживают учебно-игровые материалы: таблицы, счетные палочки и кубики Зайцева.
Учебно-игровые материалы
Таблицы чаще всего используются для обучения чтению по слогам. Метод Зайцева подразумевает таблицы и карточки большого размера: дети избавляются от лишней нагрузки на глаза и не портят осанку при работе с материалами.
Счетные палочки помогают малышам освоить методы счета «тысяча плюс», «миллион плюс» и другие.
Кубики Зайцева – самые известные учебно-игровые материалы. Кубики используются для обучения детей от одного года «складам», малыши от трех с половиной лет могут учиться читать и говорить одновременно. Зайцев предложил делить слова не на слоги, а на склады. Складами у Зайцева называются пары согласных и гласных, или гласных, или согласных с твердым знаком. По мнению педагога такой метод оптимален для обучения малышей. Это связано с тем, что, начиная учиться говорить, ребенок не произносит отдельные буквы. Он говорит: «ма», «ба», «за». В кубиках Зайцев использовал именно такой метод. Из складов ребенок довольно быстро начинает составлять слова и учится читать.
Кубики различаются по размерам, цветам и звуку, который они издают. Кубики с глухими складами заполнены деревяшками, со звонкими – кусочками металла. Цвет, звук и размер, сочетаясь, позволяют малышам не столько запоминать, сколько почувствовать буквы, склады и целые слова.
Возраст детей, обучающихся по методике Зайцева, и срок обучения
Оптимальным для обучения считается возраст от трех до четырех лет. По наблюдениям педагогов ученики этого возраста начинают читать и считать через три-четыре занятия.
Безусловно, возраст ребенка влияет на срок обучения. И двухлетнему малышу понадобится больше времени на освоение материала. Неоспоримым плюсом методики Зайцева является то, что обучение ребенка родители и педагоги могут начать с младенчества. Некоторые программы данной методики рассчитаны как раз на младенцев.
Срок обучения по сравнению с традиционными программами значительно короче, и при этом ребенок получает необходимые навыки чтения, письма, простых вычислений, а также развивает образное мышление о числовом ряде.
Еще одним достоинством методики является возможность проводить обучение дома.
О других методиках воспитания вы можете узнать в специальном разделе на сайте «Я – родитель».
Недостатки методики Зайцева
Все вышеизложенное больше отражает достоинства системы. К сожалению, у методики Николая Зайцева есть явные недостатки. Большая часть из них так или иначе связана со школьной программой.
Освоение буквенного материала

Если старшие дошкольники в рамках программы подготовки к школе готовились только по методике Зайцева, в первом классе у них могут возникнуть проблемы с изучением буквенного материала. Так, например, цвета для обозначения букв, как правило, отличаются от цветов, использованных в кубиках Зайцева.

Понимание школьником состава слова

Методика Зайцева учит детей, что слова состоят из «складов». Поэтому в школе им сложно разбирать слова не на «складов», а на корень, окончание, приставку, суффикс. В связи с этим у детей могут возникнуть трудности с произношением и правописанием.

Система непоследовательна

Склады «бэ», «вэ», «сэ» почти не используются в письменной речи. На письме по правилам русского языка эти слоги заменяются на гласную букву «е». Это опять-таки приводит к ошибкам в правописании и необходимости «переучиваться».

Система дорогостоящая

Этот недостаток говорит сам за себя. Купить ящик с учебно-игровыми материала не может позволить себе каждый родитель. Конечно, всегда можно озадачиться подготовкой материалов самостоятельно, однако процесс также достаточно трудоемок.

Марфа Бусева, детский психолог, эксперт Я – родителя

Я считаю, что методики раннего развития – попытка научить ребенка тому, к чему он еще не готов.

Чтение – процесс, предполагающий понимание текста, извлечение смысла из него. Память, мышление и речь, которые необходимы для чтения, у ребенка до двух лет существуют достаточно независимо друг от друга. Дети в раннем возрасте (от года до трех лет) еще не способны читать по-настоящему.

Выстраивание связей между частями текста, понимание, удержание в памяти прочитанного – задачи для более старшего возраста. Родителям может казаться, что малыш читает, когда он называет буквы, слоги или даже целые слова, которым его научили, но это узнавание, а не чтение. Начиная так рано учить читать, можно не только ухудшить зрение повышенной нагрузкой, но и отбить интерес к любым занятиям, что в будущем серьезно осложнит обучение ребенка.

В раннем возрасте дети познают мир через непосредственный практический опыт, игру и общение с родителями и другими людьми – это основное, на что следует делать упор, чтобы помочь маленькому ребенку в развитии.

Пятибратова Наталия Владимировна, логопед-дефектолог, Монтессори-педагог

Методика Зайцева, по моему опыту, самая лучшая и эффективная методика для развития речи у слабоговорящих и неговорящих детей. Такая методика применима к детям от одного года до трех с половиной лет. Она стимулирует речевое развитие, развивает память и мышление.

После трех с половиной лет методику Зайцева можно использовать для обучения чтению.

Кубики Зайцева. Методика Зайцева. — Методика РКИ для всех
Кубики Зайцева
Вряд ли найдется такой родитель, который бы никогда не слышал о кубиках Зайцева.
Секрет популярности очень прост – автор Зайцев Н.А. и распространители методики обещают, что занимающийся по данной методике ребенок овладеет чтением за очень короткое время. При этом материал, с которым работает ребенок в процессе обучения, прост и знаком всем нам с детства – это кубики. Поэтому не удивительно, что вопрос о том, стоит ли приобрести кубики Зайцева и вообще пользоваться этой методикой обучения, все чаще возникает у современных родителей. В данной статье мы попытаемся вкратце познакомить читателя с методикой Зайцева и аргументами «за» и «против».
Автор методики – Зайцев Николай Александрович, педагог из Санкт-Петербурга. Первые разработанные им кубики были выпущены в 1989 году.
За ними последовали пособия для быстрого овладения счетом, русским языком и чистописанием, а также пособия для изучения иностранных языков: «Стосчёт», «Русский для всех», «Пишу красиво», «Грамматика английского языка» и «Техника чтения на английском языке».
Быстрому распространению методики Зайцева и его кубиков послужила работа команды Зайцева по популяризации метода – проводилось обучение всех желающих, как в Санкт-Петербурге, так и в других регионах страны. Кубики Зайцева получили широкое распространение не только в России, но и в странах СНГ.
Стоит отметить, что Зайцевым были созданы методики по обучению чтению и грамматике на украинском, казахском, белорусском, а также татарском, армянском и французском языках.
Несомненно, методика обучения чтению по кубикам Зайцева прошла испытание временем, ведь уже более 20 лет она пользуется огромной популярностью как среди родителей, так и педагогов дошкольных учреждений.
В чем же ее секрет?
Итак, в основе методики обучения детей чтению по кубикам   Зайцева лежит давно известный принцип обучения чтению не по буквам или слогам, а по складам. (Этим принципом руководствовался еще Л.Н. Толстой, обучая ребятишек в своей школе в Ясной Поляне).
Складом считается созвучие согласного звука с гласным (на лу-гу), отдельный гласный звук в качестве слога (О-ля), отдельный согласный в закрытом слоге (ша-р), а также согласная с мягким или твердым знаком (ме-дь).
На каждой грани кубика написан один из складов, причем каждый склад имеет свой цвет. Малыш выучивает не написание отдельной буквы, а сразу написание различных складов: ба, бу, бы, са, си, се. Затем эти склады легко складываются в слова — бу-сы, гу-си.
Зайцев считает, что чтение по складам органичнее для детского восприятия, чем обучение буквам, а затем складывание из них слогов и слов, ведь сам ребенок начинает говорить складами (а-гу-а-гу-а-гу и т.д.) и слышит произносимые слова тоже складами.
Принципы обучения по методике Зайцева

• т общего к частному и от частного к общему;
•    От конкретно-образного через наглядно-действенное к словесно-логическому;
•    Обеспечение наглядности с использованием различных каналов восприятия;
•    Системная подача материала;
•    Алгоритмизация учебных действий;
•    Учет физиологии восприятия детей;
•    Охрана здоровья детей.
Давайте более подробно остановимся на каждом пункте принципов обучения детей по методике Зайцева.
Итак, складывание слов из складов-кубиков, а также разложение целого слова на склады и есть наглядная демонстрация принципа «от частного к общему и от общего к частному». Работа ребенка с кубиками Зайцева на протяжении всего процесса овладения им чтением иллюстрирует принцип «от конкретно-образного через наглядно-действенное к словесно-логическому». Сначала ребенок просто рассматривает кубики, играет с ними – здесь проявляется конкретно-образный способ мышления.
Далее взрослый знакомит ребенка со звучанием разноцветных складов, изображенных на кубиках (склады лучше не проговаривать, а пропевать вместе с крохой), потом показывает, что из этих кубиков можно складывать слова. И так ребенок овладевает чтением и созданием слов — здесь работает наглядно-действенный способ мышления.
На последнем этапе чтение становится беглым, а мышление ребенка переходит на новый этап – становится словесно-логическим.
Примером наглядности и систематизации изучаемого материала в методике Зайцева служат таблицы-тренажеры, которые входят в учебные комплекты с кубиками. С их помощью ребенок осмысляет, закрепляет и повторяет пройденный материал. Занятия с кубиками Зайцева проводятся в игровой форме, в движении, в процессе обучения чтению дети много поют, что является наглядной демонстрацией принципа «учет физиологии восприятия детей».
Принцип «охрана здоровья детей» реализуется путем исключения монотонности из учебного процесса. Дети не занимаются все время в сидячем положении, они много двигаются, методическое обеспечение позволяет проводить занятия на воздухе.
В результате, через 15-20 часов занятий с кубиками Зайцева дети четырех-пяти лет начинают читать, овладевают арифметическими операциями в пределах ста. Далее эти навыки укрепляются в совместной работе педагога и ребенка. Как заверяет автор методики Н.А. Зайцев, дети к шести-семи годам, занимаясь с кубиками два раза в неделю, способны овладеть содержанием учебных программ для второго, третьего, четвертого классов. Методика Н.А. Зайцева позволяет в короткий срок изучить грамматику русского языка, математику и английский язык.
Автор Голубова Ульяна</strong></span>
http://shkola7gnomov.ru/parrents/pedagogicheskiy_navigator/metodika_zayceva/id/1168/
Правило Зайцева: определение и примеры
Алкены синтезируются в результате реакций элиминирования.
Правило Зайцева
Во время реакций элиминирования часто существует более одного места, где двойная связь может образовываться вокруг уходящей группы. Давайте посмотрим на пример. Допустим, вы обрабатываете 2,2-бром-метилпентан сильной кислотой, что приведет к реакции отщепления. Ясно, что бромид-ион уйдет, но образуется ли двойная связь между метильной группой и углеродом основной цепи или внутри самих атомов углерода основной цепи?
2,2-бром-метил-пентан реагирует с сильным основанием во время реакции элиминирования с образованием 2,2-метил-пентена.
Когда проводят эту реакцию, преобладающим продуктом является 2,2-метилпентен.Двойная связь образуется между атомами углерода в основной цепи, а не метильными группами. Другие реакции дают аналогичные результаты.
Допустим, вы объединили 1,1-хлорметилбензол с сильным основанием и нагреванием для проведения реакции элиминирования. Будет ли двойная связь образовываться внутри кольца или с метильной группой? Опять же, большая часть продукта будет иметь двойную связь внутри кольца.
Как оказалось, реакции элиминирования имеют тенденцию давать продукты, в которых двойная связь создает наиболее сильно замещенный алкен.Но, как и все в химии, это не только для внешнего вида. Есть веская причина, по которой алкены с большим количеством заместителей являются лучшим продуктом.
Более высокозамещенные алкены имеют тенденцию быть более термодинамически стабильными по сравнению с менее замещенными алкенами. Этот процесс наблюдал и описывал русский ученый Александр Зайцев в XIX веке. Сегодня мы называем это правилом Зайцева , которое гласит, что более высокозамещенный алкен является более вероятным продуктом реакции элиминирования.Таким образом, тетразамещенные алкены более стабильны по сравнению с тризамещенными, по сравнению с дизамещенными, по сравнению с монозамещенными алкенами.
Но что делает более стабильными более замещенные алкены? Ответ — сила, называемая гиперсопряжением . Здесь электроны делокализованы по соседним пи-орбиталям соседних атомов углерода вокруг двойной связи. Таким образом, чем больше заместителей у алкена вокруг двойной связи, тем больше может происходить гиперконъюгация и тем более стабильной будет молекула.
Реакции, благоприятствующие продуктам Хоффмана
Похоже, исходя из термодинамики, мы всегда должны получать продукт Зайцева. Но помните, что в большинстве реакций элиминирования образуется смесь продуктов, продукта Зайцева и менее замещенного алкена, называемого продуктом Hoffman . Почему продукты Hoffman вообще образуются, если они менее стабильны?
Существуют определенные условия, которые отдают предпочтение продукту Хоффмана продукту Зайцева. Хотя мы обычно думаем, что молекулы слишком малы, чтобы занимать много места, все молекулы имеют трехмерную структуру.Это вступает в игру, когда основание пытается атаковать альфа-углерод или углерод, присоединенный к уходящей группе. Если поблизости есть объемные заместители или само основание представляет собой большую молекулу, продукт Зайцева может не быть получен из-за стерических препятствий , где существует конфликт в трехмерной структуре молекулы. В этом случае предпочтение будет отдаваться продукту Хоффмана, даже если он менее стабилен по сравнению с продуктом Зайцева.
Из-за стерических затруднений может быть получен продукт Хоффмана, даже если он менее термодинамически стабилен.
Рассмотрим пример.Допустим, у вас есть 1,2-бром-метилбензол. У небольшого основания, такого как ион гидроксида, не будет проблем с доступом к атому водорода, связанному с углеродом, связанным с метильной группой. Но предположим, что вы используете более крупное основание, такое как трет-бутоксид. У этой более крупной молекулы будут проблемы с доступом к углероду, примыкающему к метильной группе. В этом случае двойная связь будет образовываться по другую сторону от атома брома, образуя продукт Хоффмана.
Краткое содержание урока
Алкены представляют собой углеводородные цепи, по крайней мере, с одной двойной связью.Они образуются посредством реакций элиминирования , в которых атомы покидают молекулу, позволяя двум атомам углерода образовывать двойную связь. Реакции элиминирования обычно дают более высокозамещенный алкен, называемый продуктом Зайцева, в соответствии с правилом Зайцева , которое гласит, что более высокозамещенные алкены более стабильны из-за гиперконъюгации . Однако иногда продукт Хоффмана или менее замещенный алкен является предпочтительным, если имеется стерическое препятствие или трехмерный блок, который не позволяет основанию производить продукт Зайцева.
Никита Зайцев, З, Оттава Сенаторз, НХЛ
13 мая 2021 г., 12:32
Сенатор Никита Зайцев: Работа с нераскрытой травмой
by RotoWire Персонал | RotoWire
Зайцев (не разглашается) не будет играть за сборную России на предстоящем чемпионате мира по хоккею с шайбой, сообщает Брюс Гарриоч из Ottawa Sun.
Зайцев, очевидно, имеет нераскрытую травму, которая помешает ему принять участие в чемпионате мира в конце мая.В этом сезоне 29-летний игрок набрал 17 очков в 55 играх с сенаторами.
12 мая 2021 г., 23:20
Сенатор Никита Зайцев: два очка в финале
by RotoWire Персонал | RotoWire
Зайцев записал гол и передачу с двумя бросками и четырьмя блокировками в среду в овертайме со счетом 4: 3 над «Мэйпл Лифс».
Зайцев открыл счет с 1:08 до конца первого периода, пробив дальний удар, который прозвучал со штанги и в ворота.Он также нарисовал одинокого помощника на коротком счете Коннора Брауна посередине среднего кадра. Для Зайцева это была всего лишь вторая многоточечная игра в сезоне; другой вернулся в начале сезона. 29-летний футболист завершил сезон с четырьмя голами и 17 передачами в 55 играх.
4 мая 2021 г., 01:20
Сенатор Никита Зайцев: выход из тупика поздно
by RotoWire Персонал | RotoWire
Зайцев забил победный гол и добавил пять блоков и четыре PIM в понедельник, выиграв 2: 1 над «Виннипегом».
Зайцев расположился в правом круге вбрасывания и нанес удар по воротам Виннипега Лорана Броссойта, в результате чего «Сенаторз» одержал победу за 1:13 до конца третьего периода. Это был третий гол в году для 29-летнего защитника, чей 15 очков в этом сезоне — его лучший результат с тех пор, как он зарегистрировал 36 в качестве новичка в «Торонто» в сезоне 2016-17.
23 апреля 2021 г., 01:20
Сенатор Никита Зайцев: Управляет помощником в четверг
by RotoWire Персонал | RotoWire
Зайцев записал результативную передачу, пять попаданий и три блок-шота в победе над «Кэнакс» со счетом 3: 0.
Зайцев отдал голевую передачу в ворота Коннора Брауна в третьем периоде. 29-летний Зайцев набрал 14 очков, 61 бросок в сетку, 100 попаданий и 88 блок-шотов в 46 соревнованиях этого года. Хотя он не представляет большой угрозы для накопления очков, его физическая продукция может заставить русского синего лайнера посмотреть в более глубоких фэнтезийных форматах.
17 апреля 2021 г., 16:01
Сенатор Никита Зайцев: К бою готовы
by RotoWire Персонал | RotoWire
Зайцев (нижняя часть тела) сыграет в субботнем матче против «Канадиенс», сообщается на официальном сайте СМИ НХЛ.
Зайцев вернется в состав, пропустив всего одну игру. В этом сезоне 29-летний игрок набрал 12 очков, 89 попаданий и 81 блок-шот в 43 матчах. В субботу он будет выступать в топ-паре с Томасом Шабо.
14 апреля 2021 г., 18:49
Сенатор Никита Зайцев: заседание состоится в среду
by RotoWire Персонал | RotoWire
Зайцев (не разглашается) рано покинул разминку и не будет играть в среду против Джетс, сообщает Брюс Гарриоч из Ottawa Sun.
Зайцев пропустит свою первую игру в сезоне. 29-летний футболист набрал 11 очков (один гол, 11 передач), 89 попаданий и 81 блокированный удар в 43 матчах этого сезона. Ожидается, что Джейкоб Бернар-Докер дебютирует в НХЛ вместо Зайцева.
13 марта 2021 г., 00:40
Сенатор Никита Зайцев: Помощник слайдов Пятница
by RotoWire Персонал | RotoWire
Зайцев записал результативную передачу, четыре удара, четыре блок-шота и минус-3 в пятничном поражении от «Ойлерз» со счетом 6: 2.
Зайцев подставил партнера по защите Томаса Шабо на первый гол сенаторов в 3:06 первого периода. У 29-летнего Зайцева в последних четырех выездных матчах было три помощника. У российского синего игрока до 11 передач, 57 блок-шотов, 54 попаданий и рейтинг минус-11 в 30 играх.
9 марта 2021 г., 00:24
Сенатор Никита Зайцев: помощники в последовательных выездах
by RotoWire Персонал | RotoWire
Зайцев сделал результативную передачу, три блок-шота, два удара и два PIM в проигрыше «Ойлерз» со счетом 3: 2.
Зайцев выручил на первой минуте игры по воротам Евгения Дадонова. 29-летний Зайцев набирал голевые передачи в каждом из двух последних поединков. За год у российского защитника 10 помощников, 42 броска по воротам, 53 блок-шота и 48 попаданий с рейтингом минус-6.
8 марта 2021 г., 00:56
Сенатор Никита Зайцев: Фишка с голевой передачей
by RotoWire Персонал | RotoWire
Зайцев записал результативную передачу и пять блок-шотов в воскресной победе над «Флэймз» по серии пенальти 4: 3.
Зайцев имел второстепенного помощника в счете Колина Уайта на 7:09 второго периода. 29-летний Зайцев в 27 матчах этого года сделал 9 передач, 42 броска по воротам, 50 блок-шотов и 46 попаданий. Его рекорд в карьере — 36 очков, он был новичком в сезоне 2016-17, но с тех пор он не набирал 14 очков. Любая ценность фэнтези для русского синего игрока исходит из его хороших защитных показателей, помимо рейтинга минус 7.
22 февраля 2021 г., 08:40
Сенатор Никита Зайцев: Убил очередного помощника
by RotoWire Персонал | RotoWire
В воскресенье Зайцев сделал голевую передачу в овертайме со счетом 3: 2 над «Канадиенс».
Зайцев пробил с точки и наблюдал, как его нападающий Джош Норрис перенаправил шайбу в клетку. Хотя россиянин не смог забить свой первый гол в сезоне, у него до семи помощников в 20 играх, что приносит пользу в глубоких лигах.
16 января 2021 г., 01:16
Сенатор Никита Зайцев: двухочковая победа
by RotoWire Персонал | RotoWire
Зайцев сделал две передачи в пятничной победе над «Мэйпл Лифс» со счетом 5: 3.
Это была игра-реванш для бывшего синего игрока из Торонто, поскольку во втором периоде Зайцев зарезал двух помощников менее чем за пять минут, в том числе один из возможных победителей игры Криса Тирни. 29-летний игрок ни разу не приблизился к той продукции, которую он поставил в качестве новичка в 2016-17 годах, но, имея место во втором блоке силовой игры Sens и улучшающийся состав вокруг него, он должен быть в состоянии стать лидером. 12 очков в 58 играх, которые он набрал в прошлом сезоне.
1 апреля 2020 г., 20:04
Никита Зайцев: голевые передачи перед перерывом увеличились
by RotoWire Персонал | RotoWire
Зайцев набрал три очка в последних семи играх перед перерывом.
Зайцев уже не представлял такой атакующей угрозы со времен своего новичка, так как он стал гораздо больше защищаться. Он сократил свой плюс-минус дефицит, но это единственный способ улучшить его фантазию с 2017 года. Его можно спокойно игнорировать практически во всех форматах.
28 января 2020 г., 22:56
Сенатор Никита Зайцев: Впервые в 2019-2019 обнаруживает сеть
by RotoWire Персонал | RotoWire
Зайцев забил гол в пустых воротах и добавил четыре удара с двумя PIM в победе над Баффало со счетом 5: 2 во вторник.
Зайцев забил свой первый гол в сезоне, поразив пустые ворота из зоны защиты за шесть секунд до конца третьего периода. Он не зажигал лампу с 2 марта 2019 года в составе Торонто — 59 игр без голов. Зайцев набрал 36 очков в сезоне новичка в сезоне 2016-17, но с тех пор так и не приблизился к тому результату.
14 января 2020 г., 22:56
Сенатор Никита Зайцев: Первая игра за месяц
by RotoWire Персонал | RotoWire
Зайцев (нижняя часть тела) совершил один бросок с двух блоков и два попадания в овертайме во вторник со счетом 3: 2 от «Чикаго».
Зайцев был в составе впервые с 14 декабря и завершил свое возвращение с 17:30 ледового времени в защитной паре с Марком Боровецким. За свои последние два года в Торонто 28-летний футболист не отличался хорошей репутацией: за свой первый сезон за «Сенаторз» он сделал всего восемь результативных передач в 33 матчах.
14 января 2020 г., 16:04
Сенатор Никита Зайцев: готовы вернуться
by RotoWire Персонал | RotoWire
Как и ожидалось, Зайцев (нижняя часть тела) снова присоединится к составу на игру во вторник против «Блэкхокс» в НХЛ.com сообщает Каллум Фрейзер.
Зайцев почти на месяц был исключен из игры из-за травмы нижней части тела, так что ему определенно придется побороться с Чикаго. 28-летний игрок, набравший восемь голевых передач в 32 матчах этой кампании, будет кататься с Марком Боровецки во второй парный матч сенаторов во вторник.
13 января 2020 г., 12:32
Сенаторский Никита Зайцев: снова на тренировке
by RotoWire Персонал | RotoWire
Зайцев (нижняя часть тела) вернулся на тренировку в понедельник, сообщает TSN 1200 Ottawa.
Зайцев откатался в собственное воскресенье и выглядел достаточно хорошо, чтобы вернуться в команду на тренировке. По словам Брюса Гарриоча из Ottawa Sun, 28-летний игрок, как ожидается, будет готов к игре во вторник против «Блэкхокс», но сначала его нужно будет активировать из IR.
12 января 2020 г., 18:20
Сенатор Никита Зайцев: Самостоятельное катание
by RotoWire Персонал | RotoWire
Зайцев (нижняя часть тела) самостоятельно занимается фигурным катанием и должен вернуться на тренировку на этой неделе, сообщает Кен Уоррен из Ottawa Sun.
Зайцев пропустил последние 12 игр из-за травмы нижней части тела, последний раз играл 14 декабря. Похоже, он близок к возвращению, которое может произойти, как только в четверг поединок против Вегаса. В этом сезоне у российского синего игрока 8 передач в 32 матчах.
9 января 2020 г., 14:24
Сенатор Никита Зайцев: внесен в список IR
by RotoWire Персонал | RotoWire
Зайцев (нижняя часть тела) находится в резерве травмированных, согласно официальному медиа-сайту НХЛ.
Зайцев был исключен из игры с середины декабря из-за травмы нижней части тела, и сенаторы еще не обнародовали никаких подробностей относительно возможных сроков его возвращения. Недавно приобретенный Майк Рейли будет продолжать дополнять «Оттаву» на заднем плане, пока Зайцев не будет готов снова присоединиться к составу.
6 января 2020 г., 12:28
Сенатор Никита Зайцев: вторник не сыграет
by RotoWire Персонал | RotoWire
Зайцев (нижняя часть тела) исключен из матча с Вашингтоном во вторник, сообщает Ян Мендес из TSN 1200 Ottawa.
После активации травмированного резерва оказалось, что Зайцев здоров и готов к работе, но по-прежнему недоступен. Неясно, потерпел ли защитник неудачу в восстановлении или команда просто дает ему еще немного времени, чтобы вернуться к 100%. Дилан ДеМело (палец), похоже, собирается вернуться в состав, а Зайцев недоступен.
5 января 2020 г., 12:24
Сенатор Никита Зайцев: неожиданный результат против Тампа-Бэй
by RotoWire Персонал | RotoWire
Зайцев значится в субботнем официальном отчете о составе как «скретч» и поэтому не будет одеваться против «Молнии».
Ранее в тот же день защитник оторвался от травмированного запасного, что наводит на мысль, что Зайцев выйдет на лед в субботу, но это не так. Он сядет, а Кристиан Ярош оденется вместо Зайцева.
Дмитрий Зайцев
Дмитрий Зайцев
Зайцев Николай Дмитриевич — Санта Лючия
«Сети Петри — одни из самых интересных конструкций в математике. Я использовал их при анализе выполнения программы, а книга
Дмитрия Зайцева исследует другие свойства этих уникальных и мощных конструкций.»
Винтон Серф — президент ACM, главный интернет-евангелист Google
Eng / Русь
Видео / аудио
Доклад «Ускорение решения линейных систем на параллельных архитектурах за счет агрегации кланов» на LVEE 2019 (слайды)
Выступление Erasmus + в суперкомпьютерном центре Барселоны на тему «Ускорение решения линейных систем через состав кланов» (информация), 31 января 2019 г.
Вебинар «Сетевые вычисления Слепцова: решение для гипер-вычислений с поддержкой кибербезопасности и других приложений», 28 марта 2018 г.
Приглашенная лекция в Технологическом институте Нью-Джерси, Ньюарк — «Бесконечные сети Петри» (Информация, Слайды), 11.10,17
Приглашенная лекция в Университете Стоуни-Брук, Нью-Йорк — «Сетевые вычисления Слепцова» (Информация, Слайды), 10.10.17
Образование
1981-1986 Донецкий политехнический институт (ДПИ), прикладная математика
1988-1991 гг. Аспирантура, ДПИ, Информатика
1991 Ученый совет Киевского института кибернетики Дис. Украина, к.э.н., АСУ
2006 Ученый совет ОНАС, д.Наук, телекоммуникационные системы и сети
Вакансии
1986–1996 ДПИ, Кафедра прикладной математики и информатики (АМИ): 1986–1992 доцент, 1992–1996 доцент; главный программист в проектах по разработке программного обеспечения; системный программист; администратор компьютерной сети
1997-1998 Сургутский государственный университет, кафедра компьютерных наук и информатики, доцент; начальник Лаборатории сетевых технологий
1999-2003 гг. Информационно-вычислительный центр Одесской железной дороги, ведущий инженер
2002-2006 гг. ОНАС, кафедра сетей связи, доцент
2006- профессор
март 2005 Университет Париж-Дофин, пригласить профессора
2009-2019 Международный гуманитарный университет, кафедра компьютерной инженерии, профессор
2014-2019 Вислинский университет, кафедра компьютерных наук, профессор
июль-август 2015 г. Технический университет Дортмунда, приглашенный профессор, стипендия DAAD
Осень 2017 г. Лаборатория инновационных вычислений, Университет Теннесси, США, приглашенный профессор (стипендия Фулбрайта)
июль 2018 г., Технологический университет Эйндховена, Нидерланды, приглашенный профессор
2019- Одесский государственный экологический университет, кафедра информационных технологий, профессор
опыта
Последние проекты:
«Анализ эффективности вычислительных сетей с помощью цветных сетей Петри» — грант сотрудничества между Австрией и Украиной, 2013-2014; «Управление производством с помощью сетей Петри» — грант китайско-украинского сотрудничества, 2011-2012; «Разработка новых систем адресации для всемирных сетей (№6)» — государственный грант, 2008-2009; «Верификация сложных сетевых протоколов», 2007-2008 гг., Грант ICS НАТО.NUKR.CLG 982698; «Моделирование магистральных сетей MPLS», Укртелеком, 2007-2008 гг. Наука:
Теория сетей Петри и ее приложения. Старший член IEEE. Старший член ACM. Приложения: анализ и синтез телекоммуникационных сетей, управление производством и контроль. Учебная работа:
Лекции: Сетевые технологии, Моделирование систем и сетей, Операционные системы, Системное программное обеспечение. Авторский надзор за дипломными работами.Прежние лекции: компьютерные сети, информационные технологии, базы данных, дискретная математика, пакеты прикладных программ, раздел «Сети Петри» в курсе «Теоретические основы информатики». Практические и лабораторные: программирование, системное программирование, теоретические основы компьютеров, теоретические основы информатики, компьютерная графика, организация вычислительных процессов, теория компьютерных систем. Разработка программного обеспечения:
Главный программист по разработке системы управления и контроля предприятия «Опера-Топаз» — около 100 тысяч строк исходного кода, C.Участвовал в разработке около четырех программных комплексов средней и высокой сложности (C, Pascal). Использование: Корпорация Королева, Киев; Корпорация Моторсич, Запорожье; Корпорация Топаз, Донецк (производитель «Кольчуги»). Языки программирования: C, Паскаль, Ассемблеры. СУБД: Oracle. Телекоммуникации и администрирование сетей:
Создание Интернет-сайта surgu.wsnet.ru. Разработка Интернет-сайта dgtu.donetsk.ua. Администрирование сетевого и телекоммуникационного оборудования.Платформы: Sun SPARC / Solaris и другие Unix; Cisco; MS Windows 9x / NT / 2000.
Учебные курсы
1986 Системный программист RSX11M (DEC), ЛИМТУ, Санкт-Петербург
1994 Организация бизнеса в HiTech, RPI (США) в Киеве
1995 Интернет и веб-технологии, ОИК в Апатитах, Россия
2002 Администрирование современных ОС и СУБД, ДИИТ, Днепропетровск, Украина
Хобби
Яхтинг, горные лыжи, мост, маджонг
Недавние курсы
Фото
Фотоальбомы
Топ-10 Pj за всю историю: пары | Фигурное катание
Попытка составить 10 лучших пар за все время, а затем их ранжировать, вызвала у меня головную боль! В этот список можно было бы включить намного больше команд, чем мои друзья из CBC webland дали мне слотов.В любом случае, вот мой список, и, как обычно, мне интересно услышать ваши мысли.
Попытка составить 10 лучших пар за все время, а затем их ранжировать, вызвала у меня головную боль! В этот список можно было бы включить намного больше команд, чем мои друзья из CBC webland дали мне слотов. В любом случае вот мой список.
Согласен с моим рейтингом? Не согласны? Не стесняйтесь поставить меня прямо на свой собственный топ-10.Я хочу услышать от вас! Оставляйте свои комментарии внизу этой страницы или напишите мне в Twitter . (нажмите на имена фигуристов, чтобы посмотреть видео о них в действии)
1. Людмила Белоусова и Олег Протопопов, СССР (двукратные олимпийские чемпионы 1964 и 1968 годов, четырехкратные чемпионы мира)
Команда мужа и жены, известная как Протопоповы, — это дедушка и бабушка в моем понимании современного парного катания. Элегантные и спортивные, они были первой командой Советского Союза, выигравшей золото на Олимпийских играх в 1964 году.Советская и последующая российская олимпийская серия золотых медалей продлилась еще 42 года до 2006 года, самой продолжительной в истории Олимпийских игр.
2. Ирина Роднина и Акександер Зайцев, СССР (олимпийские чемпионы 1976 и 1980 годов, шестикратные чемпионы мира)
О гении Ирины Родниной как фигуристки ходят легенды. Сначала она соревновалась с Алексеем Улановым до 1972 года; выиграл один олимпийский титул в 1972 году и четыре титула чемпиона мира. Затем она продолжила соревноваться с Александром Зайцевым и выиграла следующие два олимпийских титула в 1976 и 1980 годах, а также еще шесть титулов чемпиона мира.
Вот интересная история: в 1973 году на Мирах в Братиславе музыка для произвольной программы Родниной и Зайцева загадочным образом остановилась на части. Пара продолжала кататься в унисон до тишины. Моя мать, которая была в здании в качестве зрителя, сказала, что рефери яростно пытался привлечь внимание фигуристов, чтобы заставить их остановиться. Они продолжили кататься и заслужили овации в конце своей программы и впоследствии выиграли титул. Образ Родниной и Зайцева, летающих по катку в Мюнхене в 1974 году на чемпионате мира с головокружительной скоростью, был невероятно впечатляющим и навсегда запечатлелся в моем подростковом зрительском мозгу.
3. Екатерина Гордеева и Сергей Гриньков, Россия (двукратные олимпийские чемпионы 1988 и 1994 годов, четырехкратные чемпионы мира)
Впервые я увидел эту замечательную команду с трибун в 1990 году в Галифаксе на чемпионате мира, где они выиграли титул. Для меня больше всего резонирует сезон их камбэков на пути к их второму олимпийскому титулу в 1994 году. Сцена была развернута в Оттаве на Skate Canada в 1993 году, и с места моего комментатора я могу сказать вам, что они были волшебными.Их связь была настолько сильной, что я почти почувствовал, что вмешиваюсь в личный момент.
Нет такого человека, который бы не знал, где он был, когда 20 ноября 1995 года услышал новость о том, что Гриньков потерял сознание и умер во время тренировки на льду. Он умер от обширного сердечного приступа, вызванного врожденным и невыявленным дефектом, в возрасте 28 лет, оставив свою 24-летнюю жену и партнершу и их трехлетнюю дочь Дарью.
4. Сюэ Шэнь и Хунбо Чжао, Китай (олимпийские чемпионы 2010 г., трехкратные чемпионы мира)
Сюэ Шэнь и Хунбо Чжао — первая китайская пара, выигравшая олимпийское золото.Я помню, как впервые увидел их на чемпионате мира в 1996 году в Эдмонтоне, где я был диктором соревнований по парам. Они были грубыми и грубыми, но одинаково динамичными. К сожалению, в том году их лучший результат остался на практике. Я прошел за кулисами Ллойда Эйслера и сказал ему, что наблюдаю за будущими чемпионами мира. Он сказал: «Этого никогда не случится». Этого не было — до 2002 года, это было в Нагано, Япония.
5. Наталья Мишкутенок и Артур Дмитриев, Россия (олимпийские чемпионы 1992 года)
Артур Дмитриев — единственный фигурист, кроме Ирины Родниной, выигравший олимпийское золото с двумя разными партнерами.Он соревновался с Натальей Мишкутенок с 1987 по 1994 год, выиграв Олимпиаду в 1992 году и олимпийское серебро в 1994 году, а также два титула чемпиона мира. Катаясь с Оксаной Казаковой с 1994 по 1998 год, они завоевали олимпийский титул в 1998 году.
В отношениях с обоими партнерами очарование и страсть Дмитриева достигли уровня зрителей. Любое катание, если не считать его старомодный способ целовать руку своего партнера в знак благодарности, было положительно обезоруживающим!
6. Елена Бережная и Антон Сихарулидзе, Россия (олимпийские чемпионы 2002 г., серебряные призеры Олимпийских игр 1998 г., двукратные чемпионы мира)
До того, как выступить с Сихарулидзе, Бережная выступала за Латвию с Олегом Шляковым.В результате неудачного вращения в начале 1996 года лезвие Шлякова раскололо череп Бережной, в результате чего она изначально не могла говорить и была временно парализована, пока она не выздоравливала. К концу 1996 года она начала кататься с Сихарулидзе, и к 1998 году они выиграли свой первый из двух подряд титулов чемпиона мира. Лично их скорость, унисон и техническое волшебство заставили меня прекратить то, что я делал, чтобы посмотреть на них.
7. Джейми Сейл и Дэвид Пеллетье, Канада (олимпийские чемпионы 2002 г., чемпионы мира 2001 г.)
Я любитель любовных историй.Просмотр хореографии Сейла и Пеллетье под одноименный саундтрек был одним из тех редких моментов, когда время остановилось. Это культовая программа Лори Никол. Всякий раз, когда я слышу эту музыку, которую кто-то использует в фигурном катании, я хочу нежно шептать ему на ухо: «Эта музыка больше не существует. Сделайте себе одолжение и найдите себе занятие по душе ».
8. Изабель Брассер и Ллойд Эйслер, Канада (двукратные бронзовые призеры Олимпийских игр 1992 и 1994 годов, чемпионы мира 1993 года)
Есть что-то в атлетизме Брассера и Эйслера, что всегда было таким захватывающим.Я помню, как видел в них конкурентов и восхищался такими элементами, как их боковой поворот, который был огромен. Их отношения отражали их приверженность общей цели, и они уважали то, что каждый из них предлагал партнерству. Они соединились на льду без «связи», что было магией этой команды.
9. Алена Савченко и Робин Шолковы, Германия (бронзовые призеры Олимпийских игр 2010 года, трехкратные чемпионы мира)
Савченко и Шолковы представляют новую породу парных фигуристов, уважаемых за их техническое мастерство.В прошлом я критиковал их отсутствие связи на льду, за исключением их произвольной программы Out of Africa, в которой их техническая сторона сочетается с эмоциями, достойными любого голливудского шедевра. Я могу смотреть это снова и снова. Это заставляет меня хотеть большего от этой команды.
10. Барб Андерхилл и Пол Мартини, Канада (чемпионы мира 1984 года)
Скорее всего, меня обвинят в предвзятости, если я включу Андерхилла и Мартини в этот список. Я могу жить с этим.Они включены, потому что представляют для меня лучший урок, который спорт может преподать спортсмену. Дело не всегда в результатах. Это о путешествии. Тяжелая работа действительно имеет значение, а настойчивость — ключ к успеху. Снимаю шляпу перед Андерхиллом и Мартини за то, что они не упустили шанс столкнуться с многочисленными катастрофическими результатами в катании. Их победа в Оттаве в 1984 году была намного слаще.
Вернуться к ссылкам специальных возможностей
Нацеливание рекомбинантного слитого белка тромбомодулина на эритроциты обеспечивает многогранную профилактику тромбов
Кровь.2012 17 мая; 119 (20): 4779–4785.
, ¹, ², ², ¹, ¹, ¹, ¹, ³, ⁴, ², ⁵, ^{6 ^{6 ^{6 ^{¹ Сергей Зайцев
¹ Программа целевой терапии, Институт трансляционной медицины и терапии и Кафедра фармакологии Медицинской школы Пенсильванского университета, Филадельфия, Пенсильвания;
М.Anna Kowalska
² Отделение гематологии, Детская больница Филадельфии, Филадельфия, Пенсильвания;
Майкл Нейман
² Отделение гематологии, Детская больница Филадельфии, Филадельфия, Пенсильвания;
Рональд Карнемолла
¹ Программа целевой терапии, Институт трансляционной медицины и терапии и Департамент фармакологии Медицинской школы Пенсильванского университета, Филадельфия, Пенсильвания;
Самира Тлиба
¹ Программа целевой терапии, Институт трансляционной медицины и терапии и Департамент фармакологии, Медицинская школа Университета Пенсильвании, Филадельфия, Пенсильвания;
Bi-Sen Ding
¹ Программа целевой терапии, Институт трансляционной медицины и терапии и Департамент фармакологии, Медицинская школа Университета Пенсильвании, Филадельфия, Пенсильвания;
Аарон Стонестром
¹ Программа целевой терапии, Институт трансляционной медицины и терапии и Департамент фармакологии Медицинской школы Пенсильванского университета, Филадельфия, Пенсильвания;
Дирк Спитцер
Департаменты ³ Хирургия и
Джон П.Аткинсон
⁴ Медицина, Школа медицины Вашингтонского университета, Сент-Луис, Миссури;
Mortimer Poncz
² Отделение гематологии, Детская больница Филадельфии, Филадельфия, Пенсильвания;
Дуглас Б. Сайнс
⁵ Отделение патологии и лабораторной медицины, Медицинский факультет Пенсильванского университета, Филадельфия, Пенсильвания; и
Charles T. Esmon
⁶ Программа исследований биологии сердечно-сосудистой системы, Лаборатория биологии свертывания крови, Фонд медицинских исследований Оклахомы и Медицинский институт Говарда Хьюза, Оклахома-Сити, OK
Владимир Р.Музыкантов
¹ Программа целевой терапии, Институт трансляционной медицины и терапии, Кафедра фармакологии, Медицинская школа Университета Пенсильвании, Филадельфия, Пенсильвания;
¹ Программа целевой терапии, Институт трансляционной медицины и терапии и Департамент фармакологии, Медицинская школа Университета Пенсильвании, Филадельфия, Пенсильвания;
² Отделение гематологии, Детская больница Филадельфии, Филадельфия, Пенсильвания;
Отделения ³ Хирургия и
⁴ Медицина, Школа медицины Вашингтонского университета, Сент-Луис, Миссури;
⁵ Кафедра патологии и лабораторной медицины, Медицинский факультет Пенсильванского университета, Филадельфия, Пенсильвания; и
⁶ Программа исследований биологии сердечно-сосудистой системы, Лаборатория биологии свертывания крови, Фонд медицинских исследований Оклахомы и Медицинский институт Ховарда Хьюза, Оклахома-Сити, OK
Автор, отвечающий за переписку. Поступило 20 декабря 2011 г .; Принято 19 марта 2012 г.
Copyright © 2012 Американское общество гематологов Эта статья цитируется в других статьях в PMC. Дополнительные материалы
Дополнительные методы, рисунки и видео
GUID: 1396FAF3-0B44-473C-9209-4BB6C3C6A5A5
GUID: ADF9F4A7-4568-4883-88C7-F31E7FB93787
GUID: 67A48293-D9A7-4DB8-9551-E9DCDAB3F76F
GUID: FC07201B-F5E8-44D0-A0FE-FBFEB8584C1B
GUID: 24742C4E-3077-40E6-BE85-76097C3B6193
GUID: 484AE2D5-611B-4FE9-811D-4401B9731AE3
GUID: 48BDB3D5-E72D-43E3-9D77-548E858B90DB
GUID: D5A3F32D-9306-40A0-B9BB-CBE491EC2396
Abstract
Тромбин вырабатывает фибрин и активирует тромбоциты и эндотелий, вызывая тромбоз и воспаление.Эндотелиальный тромбомодулин (TM) изменяет субстратную специфичность тромбина в сторону расщепления протеина C плазмы на активированный протеин C (APC), который противодействует его тромботической и воспалительной активности. Эндогенная активность ТМ подавляется при патологических состояниях, а антитромботические вмешательства с участием растворимых ТМ ограничиваются быстрым выведением из крови. Чтобы преодолеть эту проблему, мы слили TM с одноцепочечным фрагментом (scFv) антитела, нацеленного на красные кровяные тельца. scFv / TM катализирует тромбин-опосредованное образование активированного протеина C и связывается с циркулирующими эритроцитами без видимого повреждения, тем самым продлевая время его циркуляции и биодоступность на порядки по сравнению с растворимыми TM.В моделях на животных однократная доза scFv / TM, но не растворимого TM, предотвращает активацию тромбоцитов и закупорку сосудов сгустками. Таким образом, scFv / TM служит пролекарством и обеспечивает тромбопрофилактику в низких дозах (0,15 мг / кг) посредством многогранных механизмов ингибирования тромбоцитов и коагуляции.
Введение
Тромбин — это протеаза, которая превращает фибриноген в фибрин и активирует тромбоциты и эндотелий, расщепляя рецепторы, активируемые протеазой (PAR), что способствует адгезии клеток крови, образованию тромбов и воспалению.^1–6 Эти эффекты тромбина подавляются тромбомодулином (TM), трансмембранным эндотелиальным тромбин-связывающим гликопротеином. TM изменяет субстратную специфичность тромбина в отношении расщепления протеина C плазмы на активированный протеин C (APC), который инактивирует факторы свертывания крови Va и VIIIa и ингибирует PAR-опосредованные протромботические и провоспалительные эффекты тромбина. ^7–9 При патологиях, включая ишемию, окислительный стресс, тромбоз, воспаление, сепсис и различные сосудистые заболевания, эндогенная ТМ подавляется за счет инактивации окислителями, снижения синтеза, интернализации и выделения.^10–13 В результате протромботические и провоспалительные механизмы могут подавлять эффективность эндогенной системы TM / APC. ^11–17
Инфузия рекомбинантных APC помогает противодействовать этим патологическим механизмам, но системные эффекты этой активной протеазы предрасполагают к кровотечению и ограничивают ее клиническое применение. ^18–23 Напротив, TM действует только в присутствии патологических медиаторов, например тромбина. Теоретически восполнение ТМ может обеспечить безопасную и эффективную альтернативу избирательному подавлению тромбоза и воспаления в местах образования тромбина.В поддержку этой концепции трансфекция генов и вливание рекомбинантных ТМ облегчают тромбоз и воспаление на животных моделях. ²⁴ Однако успешному внедрению этого подхода к тромбопрофилактике в клиническую область препятствует неприменимость генной терапии в острых условиях и неблагоприятная фармакокинетика растворимого рекомбинантного TM (sTM), который быстро выводится из кровотока. ²⁵
Чтобы преодолеть эти проблемы, мы нацелили рекомбинантные ТМ на красные кровяные тельца (эритроциты) в качестве носителей, используя стратегию, оптимизирующую биодоступность терапевтических средств, действующих в просвете сосудов.^26,27 Связывание рекомбинантных терапевтических белков с эритроцитами заметно продлевает их кровообращение, увеличивает их эффективность и снижает системные побочные эффекты. ^28,29 Например, вариант рекомбинантной проурокиназы, слитый с одноцепочечным фрагментом антитела ³⁰, полученным из моноклонального антитела (mAb), ³¹, которое распознает детерминанту гликофорина A мыши (GPA), надежно закрепленный на мембранах циркулирующих эритроцитов и обеспечил длительную тромбопрофилактику.³² В нашей текущей работе мы изучали функцию и эффективность нового биотерапевтического белка, состоящего из фрагмента антитела, полученного из mAb Ter-119 (scFv Ter-119), слитых с внеклеточной частью TM мыши (scFv / TM). .
Преимущество вновь синтезированного гибридного белка по сравнению с ранее описанными ^32–35 основано на различиях в механизме. Активация плазминогена способствует лизису существующих сгустков, что может быть связано с задержкой реперфузии.Напротив, scFv / TM предотвращает активацию тромбоцитов и эндотелиальных клеток и образование сгустков. Теоретически тот факт, что ТМ не влияет напрямую на кровоостанавливающие сгустки, также может повысить эффективность и безопасность тромбопрофилактики. Более того, наши данные показывают, что scFv / TM, нацеленный на эритроциты, имеет значительно более длительную продолжительность жизни в кровотоке, чем sTM, обеспечивая длительную тромбопрофилактику, недостижимую с аналогичными дозами sTM, дополнительно повышая его профиль безопасности.
Методы
Материалы
Химические вещества были получены от Sigma-Aldrich, если не указано иное.Белки метили Na [¹²⁵ I] (PerkinElmer Life and Analytical Sciences). Эритроциты из свежей антикоагулированной крови мыши были помечены [⁵¹ Cr] Cl ₂. ²⁸ Все эксперименты на животных проводились с одобрения Институционального комитета по уходу и использованию животных Школы медицины Пенсильванского университета.
Экспрессия scFv / TM
Мы использовали богатый серином линкерный пептид для слияния TM с scFv, клонированным из Ter-119, крысиных mAb к GPA мыши.^31–35 Были созданы стабильные линии клеток S2 дрозофилы, экспрессирующие scFv / TM и sTM. ²⁶ Белки очищали из среды с использованием аффинной колонки M2 (anti-flag). ³³ Белок мигрировал на SDS-PAGE в виде единственной полосы приблизительно 85 кДа.
Генерация APC с помощью sTM и scFv / TM in vitro
Свободные scFv / TM или sTM (1-16 нМ) инкубировали с 5 нМ бычьим тромбином и 300 нМ человеческим протеином C в течение 20 минут при комнатной температуре. Тромбин гасили гирудином (50 ед. / Мл), и APC измеряли с помощью Spectrozyme (OD 405 нм).²⁶
Связывание scFv / TM с эритроцитами мыши
Измеряли связывание ¹²⁵ I-scFv / TM с мышиными эритроцитами по сравнению с человеческими эритроцитами. ^29,32 Для оценки кинетики диссоциации мышиные эритроциты, нагруженные ¹²⁵ I-scFv / TM и промытые для удаления несвязавшегося материала, ресуспендировали в PBS / BSA в течение различного времени и измеряли радиоактивность в супернатанте и осадке. Для тестирования агглютинации эритроцитов суспензии мышиных эритроцитов в лунках 96-луночного V-образного планшета инкубировали в течение 1 часа с возрастающими концентрациями scFv / TM или родительского антитела scFv (eBioscience).³⁶
Тромбин-опосредованная активация протеина С эритроцитами, нагруженными scFv / TM
Мышиные эритроциты, покрытые приблизительно 2,5 × 10 ⁴ молекулы scFv / TM на один эритроцит были ресуспендированы при гематокрите 2% (конечная концентрация ~ 20 нмоль Связанный с эритроцитами scFv / TM) и инкубировали с 20 нМ бычьего тромбина и 300 нМ протеина C в течение 1 часа при комнатной температуре. Эритроциты удаляли центрифугированием, тромбин гасили гирудином и измеряли амидолитическую активность APC в супернатантах.²⁶
Распределение в тканях и клиренс RBC-scFv / TM в крови у мышей
⁵¹ Cr-меченные эритроциты мыши (⁵¹ Cr-RBC) или ⁵¹ Cr-RBC, нагруженные ¹²⁵ I- scFv / TM против GPA (~ 4 × 10 ⁴ копий на RBC) вводили анестезированным мышам через яремную вену (внутривенно). В назначенное время отбирали кровь в гепарине, центрифугировали при 1200, g, и измеряли радиоактивность в плазме, осадках эритроцитов и органах.²⁹ В других когортах распределение ¹²⁵ I-scFv / TM и ¹²⁵ I-sTM было измерено таким же образом.
Генерация APC in vivo
Мышам внутривенно вводили 4 мг / кг scFv / TM или эквимолярное количество sTM за 1 час до внутривенной инъекции 16 Ед / кг тромбина. Кровь брали через 10 минут и измеряли APC в плазме с помощью ELISA с захватом. ^37,38
scFv / TM на мышиной модели тромбоза яремной вены
Мы использовали мышиную модель острой тромботической окклюзии.³² Эквимолярные количества scFv / TM (0,15 мг / кг), sTM (0,1 мг / кг) или PBS вводили через яремную вену. Через час был индуцирован тромбоз обнаженных контралатеральных яремных вен с помощью 15% FeCl ₃, нанесенного на адвентицию на 2 минуты. Время до окклюзии сосудов и общий кровоток в течение последующих 30 минут измеряли с помощью проточного доплеровского зонда 0,5-VB (Transonic Systems).
scFv / TM и активация тромбоцитов тромбином
Активация тромбоцитов детектировалась с использованием флуоресцентно меченного антитела Р-селектина.Выделенные тромбоциты мыши ^11,39,40 суспендировали (1 × 10 ⁸ / мл) в буфере Tyrode, содержащем 3 мг / мл альбумина ¹¹, и инкубировали с эритроцитами, нагруженными scFv / TM (~ 2,5 × 10 ⁴ молекул / эритроцитов) или контрольных эритроцитов. Тромбин (0,2 Ед / мл) или пептид AYP-PAR4 (500 мкг / мл) добавляли в течение 30 минут при 37 ° C с последующим добавлением меченного FITC антитела P-селектина в течение 30 минут при комнатной температуре. Реакцию останавливали разбавлением 1 мл буфера Tyrode. P-селектин измеряли с помощью анализа FACS.Мы также вводили мышам внутривенно растворимые scFv / TM или sTM (4 мг / кг). Кровь собирали через 1 час, разбавляли в 10 раз буфером Тироде, стимулировали тромбином (0,5 Ед / мл) или носителем в течение 30 минут и измеряли экспрессию Р-селектина.
scFv / TM в модели лазерного повреждения сосуда кремастера
Прижизненная видеомикроскопия использовалась для мониторинга образования сгустка в сосудистой сети мышц кремастера. Микрососуды исследовали с помощью микроскопа Olympus BX61WI с размером 40 × / 0.Водно-иммерсионный объектив с 8 числовой апертурой. Животным вводили scFv / TM (4 мг / кг) или эквимолярный sTM через яремную вену за 1 час до травмы. Меченые антитела к мышиному фибрину (любезно предоставлены доктором Хартмутом Вейлером, Университет Висконсина) и тромбоцитами вводили за 5 минут до травмы. ⁴¹ Повреждение сосудов диаметром от 20 до 40 мкм было вызвано с использованием системы азотного лазера SRS NL100 при уровне энергии 65% на краю стенки сосуда. Колокализация изучалась с использованием 2 флуоресцентных каналов, 490 и 647 нм, плюс яркое поле.Данные собирались в течение 2,5 минут при 5 кадрах в секунду (к / с; 750 кадров на исследование). На мышь повреждали максимум 5 артериол и 5 венул.
Анализ данных
Данные представлены как среднее значение ± стандартная ошибка среднего по крайней мере 3 отдельных экспериментов. Различия между группами проверяли на статистическую значимость с использованием критерия Стьюдента t или ANOVA. Статистическая значимость была установлена на уровне P, меньше 0,05.
Дополнительные сведения см. В дополнительных методах (доступно на веб-сайте Blood ; см. Ссылку «Дополнительные материалы» в верхней части онлайн-статьи).
Результаты
Связывание слитого белка scFv / TM с эритроцитами-мишенями
A демонстрирует дизайн кДНК, кодирующей scFv / TM, нацеленный на GPA мыши. Трансфицированные клетки S2 секретируют белок, который мигрирует в виде одной полосы (молекулярная масса ~ 85 кДа) при SDS-PAGE и вестерн-блоттинге (не показано). ¹²⁵ Меченный I scFv / TM связывался с эритроцитами мыши дозозависимым образом, достигая уровня 2,5 × 10 ⁴ по сравнению с менее чем 100 молекул на эритроциты человека при максимальной использованной концентрации (B).Связывание с эритроцитами мыши было быстрым, достигая 50% от B _max в течение 10 минут (дополнительная фигура 1A). Как и ожидалось, моновалентный scFv / TM не агглютинировал эритроциты мыши и подчеркивает ожидаемую моновалентную природу слитого белка. С другой стороны, исходное mAb Ter-119 вызывало значительную агглютинацию эритроцитов, соответствующую двухвалентной природе иммуноглобулинов G-типа, даже при таких низких концентрациях, как 4 мкг / мл (дополнительная вставка на рис. 1A). Связывание scFv / TM с эритроцитами мыши было стабильным (т.е. не более 10% связанного слитого белка отделялось от эритроцитов в течение 3 часов; дополнительная фигура 1B).
Молекулярный дизайн, связывание и APC-генерирующая активность scFv / TM. (A) Схематическая диаграмма, описывающая стратегию клонирования слитой конструкции scFv / TM. Конечная конструкция содержит тройной тег FLAG на С-конце, введенный для очистки (не показан). (B) Связывание ¹²⁵ I-scFv / TM с мышиными эритроцитами после 1-часовой инкубации с 1% суспензией промытых эритроцитов и удаления свободного белка (предварительное покрытие). Открытый кружок в правом нижнем углу представляет связывание с эритроцитами человека для контроля специфичности.(C) Образование APC тромбином in vitro стимулируется эритроцитами мыши, предварительно загруженными scFv / TM. Человеческие эритроциты, предварительно загруженные scFv / TM, и незагруженные мышиные эритроциты служат в качестве отрицательного контроля. Если не указано иное, данные в этом и последующих рисунках показаны как среднее ± SEM (n = 3). Обратите внимание, что полосы отклонения часто слишком малы, чтобы быть заметными.
scFv / TM, нагруженный эритроцитами, способствует образованию APC тромбином
Очищенный scFv / TM и контрольный нецелевой растворимый TM (sTM) стимулировали опосредованное тромбином превращение протеина C в APC в зависимости от дозы с почти идентичной активностью (дополнительный рисунок 1С).Это открытие предполагает, что N-концевое удлинение (scFv) не оказывает отрицательного влияния на биоактивность TM, являющегося эффекторным доменом слитого белка. Активность APC генерировалась только мышиными эритроцитами, предварительно загруженными scFv / TM, и только в присутствии тромбина, тогда как минимальная активность APC генерировалась во всех других экспериментальных условиях (C). Эти результаты показывают, что слитый белок, нацеленный на мембрану, является полностью биологически активным.
Связывание с эритроцитами увеличивает время полужизни scFv / TM в кровотоке, не вызывая пагубного воздействия на клетки-носители.
Затем мы проверили влияние scFv / TM на выживаемость эритроцитов.⁵¹ Cr-меченные эритроциты мыши предварительно покрывали ¹²⁵ I-scFv / TM (~ 2,5 × 10 ⁴ копий, связанных на один RBC) и вводили мышам. Уровень ⁵¹ Cr в крови и основных органах оставался стабильным в течение по крайней мере 6 часов после инъекции scFv / TM-нагруженных ⁵¹ Cr-RBC по сравнению с контрольными ⁵¹ Cr-RBC (; дополнительный рисунок 2). Почти 100% радиоактивности крови было обнаружено в осадке эритроцитов, и лишь незначительные количества присутствовали в плазме (B, D; дополнительный рисунок 2B).Следовательно, scFv / TM не был захвачен капиллярами и не ускорял элиминацию эритроцитов-носителей.
Предварительная загрузка scFv / TM не влияет на RBC кровообращение и распределение тканей. Радиоактивность крови и тканей через 1 час (A-B) или 6 часов (C-D) после внутривенной инъекции ⁵¹ Cr-меченных эритроцитов мыши, предварительно загруженных ¹²⁵ I-scFv / TM (n = 5). (B, D) Радиоактивность в осадке эритроцитов и в плазме соответственно.
Распределение ¹²⁵ I-меченых scFv / TM и ⁵¹ Cr-меченных RBC было почти одинаковым через 1 час после инъекции (A-B), что указывает на стабильное связывание с RBC.Со временем соотношение между ¹²⁵ йода и ⁵¹ Cr в крови постепенно снижалось с примерно 1 до примерно 0,75 и примерно 0,55 через 1, 3 и 6 часов после инъекции, соответственно (A, C; дополнительный рисунок 2A). В результате уровень scFv / TM, меченный ¹²⁵ I крови, медленно снижался после инъекции RBC-scFv / TM, с 85% введенной дозы (ID) через 1 час до примерно 50% через 3 часа и примерно 40% через 1 час. 6 часов (; дополнительный рисунок 2). Таким образом, значительная часть scFv / TM оставалась связанной с эритроцитами в течение многих часов после инъекции предварительно загруженного RBC-scFv / TM in vivo.
Затем мы исследовали тканевое распределение и фармакокинетику ¹²⁵ I-scFv / TM по сравнению с нецелевым sTM, введенным непосредственно в кровоток мышам. Через три часа после внутривенной инъекции только незначительная фракция sTM была обнаружена в крови и органах, тогда как большая часть scFv / TM оставалась в крови, а небольшая фракция — в печени (A). В более ранние моменты времени (0,5 и 1 час) более высокая доля введенного scFv / TM временно обнаруживалась в печени (дополнительная фигура 3).Однако прикрепление введенного scFv / TM к циркулирующим эритроцитам оставалось стабильным, т. Е. 95% слитого белка в крови было связано с эритроцитами на всем протяжении (вставка дополнительного рисунка 3).
Распределение в тканях и циркуляция радиоактивно меченных scFv / TM и sTM у мышей. (A) Распределение в органах ¹²⁵ I-scFv / TM и sTM через 3 часа после внутривенной инъекции. (B) Кинетика клиренса крови scFv / TM и sTM (n = 3). Врезка: уровни APC в плазме через 10 минут после инъекции тромбина через 1 час после инъекции scFv / TM или sTM (n = 5).
В результате прикрепления к циркулирующим эритроцитам примерно 40% введенных ¹²⁵ I-меченых scFv / TM было обнаружено в крови через 3 часа после инъекции, после чего уровень медленно снижался с течением времени. Более 10% введенной дозы оставалось в крови через 2 дня после инъекции (B; дополнительный рисунок 3). Напротив, только приблизительно 10% ненаправленных sTM было обнаружено в крови через 1 час после внутривенной инъекции (открытые символы B в нижнем левом углу) из-за быстрого удаления из печени.Кроме того, scFv / TM сохранял свою биологическую активность в кровотоке. Тромбин вводили внутривенно через 1 час после введения эквимолярного количества scFv / TM или растворимого TM и измеряли активность APC в плазме. Тромбин генерировал значительно большую активность APC у мышей, предварительно обработанных scFv / TM, по сравнению с sTM (вставка B, вычитается базальный уровень APC, генерируемый одним тромбином). Этот результат отражает фармакокинетику scFv / TM, связанного с эритроцитами, и показывает, что перенос эритроцитов увеличивает биодоступность TM.
Нацеленный на эритроциты scFv / TM предотвращает тромбоз
Затем мы вводили эквимолярные количества scFv / TM или sTM мышам за 1 час до индукции окклюзионных тромбов в яремной вене.Допплеровский анализ перфузии крови показал, что профилактическая инъекция sTM не влияла на частоту или продолжительность тромботической окклюзии по сравнению с контрольной группой, получавшей PBS (; дополнительный рисунок 4A-B). Напротив, мыши, которым предварительно вводили 0,15 мг / кг scFv / TM, были защищены от образования окклюзионных венозных сгустков (; дополнительная фигура 4C-D). Мы наблюдали временное снижение перфузии только у 2 из 8 мышей, получавших scFv / TM, но перфузия быстро восстанавливалась до уровней, близких к уровням до инъекции (дополнительный рисунок 4C).Кровоток, измеренный по площади под кривой значений доплеровской перфузии, показал, что животные, получавшие scFv / TM, сохраняли 82% ± 3% (SEM) нормального кровотока по сравнению с 28% ± 2% (SEM) у животных, получавших sTM, и 21% ± 2% (SEM) в группе, получавшей PBS ( P = 3 × 10 ⁻¹⁰ при сравнении sTM и scFv / TM, и P = 2 × 10 ⁻¹⁰ при сравнении scFv / TM и PBS).
Тромбопрофилактика с помощью scFv / TM на модели венозного тромбоза у мышей. Окклюзию яремной вены индуцировали с помощью FeCl ₃ через 1 час после инъекции PBS или эквимолярных доз scFV / TM по сравнению с sTM, и кровоток контролировали с помощью допплера (дополнительная фигура 4).На графике показаны данные для каждой группы, представленные в виде процента кровотока до травмы в яремной вене в течение первых 30 минут после индукции тромбоза; N = 8 на группу. * P = 3 × 10 ⁻¹⁰, sTM по сравнению с scFv / TM. # P = 2 × 10 ^-10, scFv / TM по сравнению с PBS.
scFv / TM, нагруженный эритроцитами, ингибирует активацию тромбоцитов тромбином
Антитромботический эффект scFv / TM может быть опосредован антикоагулянтными свойствами APC (вставка B) или ингибированием клеточной передачи сигналов тромбина.Мы проверили, подавляет ли scFv / TM, нагруженный эритроцитами, прямую активацию тромбин-опосредованной тромбоцитов. Эритроциты, нагруженные scFv / TM, ингибировали активацию тромбоцитов тромбином (обнаруживаемым воздействием P-селектина), но не пептидом AYP-PAR4 (A-B). Чтобы оценить, происходит ли это in vivo, кровь собирали через 1 час после инъекции эквимолярных количеств scFv / TM или sTM, разбавляли до гематокрита 5% и добавляли тромбин для инициации активации тромбоцитов. Анализ FACS показал, что тромбин вызывал экспрессию Р-селектина на тромбоцитах мышей, которым вводили PBS или sTM, но не от мышей, которым вводили scFv / TM (C).
scFv / TM, нагруженный эритроцитами, ингибирует активацию тромбоцитов тромбином. (A) Экспрессия Р-селектина на тромбоцитах, смешанных с эритроцитами (гематокрит 5%). Покоящиеся тромбоциты (синяя линия) и тромбоциты, стимулированные тромбином (черная линия) или пептидом AYP-PAR4 (красная линия). (B) То же, что и на панели A, но эритроциты предварительно инкубировали с scFv / TM. Эритроциты, нагруженные scFv / TM, ингибировали активацию тромбоцитов тромбином (черная линия), но не AYP (красная линия). (C) Мышам (n = 3 для каждой руки) вводили PBS, sTM или scFv / TM за 1 час до сбора крови.Экспрессию P-селектина измеряли, как на панели A. Инъекция scFv / TM предотвращает активацию тромбоцитов тромбином по сравнению с sTM ( P = 0,0357).
Комбинированное ингибирование агрегации тромбоцитов и отложения фибрина в микроциркуляторном русле с помощью scFv / TM
Наконец, мы исследовали влияние scFv / TM на мышиной модели образования тромба, вызванного лазерным повреждением сосудов, с использованием флуоресцентной микроскопии in situ в реальном времени. Фибрин и активированные тромбоциты, образующие сгусток, были идентифицированы с использованием флуоресцентных меток («scFv / TM в модели повреждения кремастера»).Дополнительные видеоролики показывают быстрое отложение тромбоцитов с последующим фибрином в местах повреждения мелких артерий и вен у нелеченных мышей. Мыши, которым вводили PBS или sTM за 1 час до травмы, показали сравнимые повреждения отложения тромбоцитов и фибрина (AB, DE; дополнительные видеоролики 1-4), тогда как scFv / TM заметно ингибировали отложение тромбоцитов и фибрина на всех участках повреждения сосудов (C, F ; дополнительные видео 5-6).
Влияние scFv / TM на образование тромбов в артериолах и венулах, обнаруженное с помощью флуоресцентной микроскопии in situ в реальном времени. Физиологический раствор (A, D), sTM (3 мг / кг; B, E) или эквимолярная доза scFv / TM (C, F) вводили в яремную вену за 1 час до травмы; N = 3 на группу. Полосы показывают зависящее от времени накопление тромбоцитов и фибрина в местах повреждения артериол (A-C) и венул (D-F). P = 0,0318, sTM по сравнению с scFv / TM.
Обсуждение
Тромбоз и кровотечение являются одними из наиболее частых причин смерти и инвалидности в США. ^1,2 Существует потребность в более эффективной профилактике у пациентов с острым риском тромбоза, например в раннем послеоперационном периоде, при нестабильной стенокардии, транзиторной ишемической атаке и остром инфаркте миокарда без подъема сегмента ST, когда существует риск кровотечение является значительным из-за основного заболевания или одновременного лечения.Доступные в настоящее время антитромботические препараты, включая антикоагулянты, такие как кумадин, фактор Ха или ингибиторы тромбина, ^3-5 и ингибиторы тромбоцитов, включая антагонисты аспирина и пуринергических рецепторов, снижают риск последующих сердечно-сосудистых событий примерно на 25-50%. . ^6–15 Таким образом, ни один агент не предотвращает тромбоз у большинства пациентов, и все они увеличивают риск кровотечения из-за системной активности. Более идеальный тромбопрофилактический агент должен обладать следующими свойствами: (1) циркулировать в виде пролекарства в течение достаточного времени, чтобы покрыть период наибольшего риска, (2) нацеливать на зарождающиеся окклюзионные тромбы, сохраняя при этом существующие гемостатические сгустки на стенках, и (3) подавлять множественные интерактивные протромботические механизмы.
Теоретически пополнение оси TM естественного антитромботического пути может служить примером этих атрибутов. Рекомбинантный ТМ является особенно привлекательным средством для быстрого начала тромбопрофилактики в острых и подострых ситуациях, но его трансляционный потенциал ограничен быстрым устранением. TM, слитый с антителом к тканевому фактору (TF), показал антитромботическую активность на модели животных, ⁴², но TF быстро исчезает после того, как провокация для его экспрессии прошла, тогда как свободные слитые белки циркулируют в течение ограниченного времени.Следовательно, недостаточное время жизни в кровотоке ограничивает потенциал существующих молекулярных итераций рекомбинантных ТМ как подхода к тромбопрофилактике.
Результаты, представленные в этой статье, показывают, что новый рекомбинантный гибридный белок, сочетающий внеклеточный домен TM с фрагментом scFv, связывающимся с эритроцитами, решает проблему, заметно продлевая его внутрисосудистую фармакокинетику и биодоступность без повреждения эритроцитов-носителей. Основная фракция scFv / TM быстро связывается с циркулирующими эритроцитами и медленно диссоциирует, наделяя лекарство внутрисосудистым периодом полураспада в несколько часов.Кинетика отслоения in vivo быстрее, чем in vitro (B по сравнению с дополнительным рисунком 1), что, вероятно, является результатом воздействия механических факторов (например, повторяющихся циклов высокого напряжения сдвига), что заслуживает дальнейшего изучения.
Исследования на двух различных моделях тромбоза демонстрируют, что scFv / TM обеспечивает более длительную и эффективную тромбопрофилактику, чем растворимые TM, как на венозной, так и на артериальной сторонах сосудистой сети, а также в больших и малых сосудах, которые различаются экспрессией внутренних компонентов Система TM / APC.Следует отметить, что однократная низкая доза scFv / TM (0,15 мг / кг) обеспечивала тромбопрофилактику, тогда как антитромботические белки, включая APC и активаторы плазминогена, требуют на порядок более высоких терапевтических доз и не имеют профилактического применения.
Исследования in vitro и in vivo предполагают, что scFv / TM ингибирует тромбоз через APC-зависимые и независимые пути. Следует отметить, что в эксперименте, в котором scFv / TM ингибировал активацию тромбоцитов (A-B), не было протеина C. Исследования, показывающие, что scFv / TM ингибирует активацию тромбоцитов тромбином, могут указывать на то, что RBC / scFv / TM секвестрирует тромбин и / или что тромбин, захваченный RBC / scFv / TM, менее способен расщеплять PAR4 и генерировать пептид, активирующий рецептор.Это согласуется с выводом о том, что комплекс не защищает от активации тромбоцитов при прямом добавлении пептида AYP-PAR4.
Эти исследования были предназначены для проверки эффективности scFv / TM в качестве краткосрочного метода тромбопрофилактики с быстрым началом у пациентов с неизбежным риском тромбоза или ретромбоза, таких как послеоперационные пациенты, а не в качестве средства улучшения влияние уже существующих сгустков. Однако scFv / TM, отдельно или в сочетании с другими агентами тромбопрофилактики, может способствовать обмену сгустка, который зависит от постоянного образования тромбина и привлечения фибрина для компенсации фибринолиза.Потребуются дополнительные исследования, чтобы полностью определить терапевтическое окно scFv / TM в профилактике и лечении тромбозов.
Изначально предполагалось, что mAb Ter-119 распознает GPA-ассоциированный белок на эритроцитах мыши ³¹, но позже было доказано, что оно напрямую взаимодействует с этим сиалогликопротеином, поверхностная плотность которого составляет приблизительно 10 ⁶ молекул на клетку. ^43–45 Те же авторы также установили, что GPA и band3, анионообменник, столь же обильный на мембране RBC, как и сам GPA, взаимодействуют друг с другом в мембране RBC.⁴³ Кроме того, лигирование GPA с препаратами двухвалентных (mAb), а также моновалентных антител (Fab) может привести к ригидизации мембраны эритроцитов, что предполагает повышенную чувствительность к деградации из-за физического стресса, такого как прохождение через мелкие капиллярные сосуды. in vivo. ⁴⁶ Однако в более позднем исследовании мышиные эритроциты, покрытые бивалентным фрагментом F (ab ‘), полученным из Ter-119, ₂ сохраняли циркуляцию намного дольше, чем те, которые покрыты mAb Ter-119 после инфузии в C57BL / 6 мышей.⁴⁷ Следовательно, мы не ожидаем пагубных структурных последствий для гомеостаза эритроцитов из-за моновалентной природы scFv / TM; и, с чисто количественной точки зрения, менее 4% доступных сайтов связывания требуется для достижения эффективной защиты от образования сгустков. Данные, представленные в нашем текущем исследовании и нескольких предыдущих отчетах с использованием других таргетных терапевтических средств, направленных на этот антиген RBC ^30,32,35,48, подтверждают мнение о том, что вредные изменения в функции и выживаемости RBC вряд ли произойдут при использовании такого подхода.С точки зрения трансляции, в настоящее время мы находимся в процессе использования уникальных библиотек фагового дисплея для создания scFv, которые связываются с человеческими эритроцитами. Конечно, прежде чем перейти в клиническую область, будут тщательно изучены многогранные аспекты безопасности этого подхода, в том числе потенциальные неблагоприятные воздействия на гомеостаз эритроцитов.
В заключение, это исследование показывает, что нацеливание scFv / TM на эритроциты формирует стабильные, циркулирующие и высокоэффективные антитромботические комплексы, которые ингибируют образование APC и тромбин-опосредованное ингибирование тромбоцитов и, таким образом, предотвращают тромбоз.ТМ также может действовать, подавляя воспаление, которое обычно предшествует тромбозу. ^2,49,50 Дополнительные исследования, включающие гуманизацию партнеров по слиянию, увеличение сложности и актуальности моделей тромбоза и более глубокое исследование безопасности, необходимы, чтобы помочь определить, обеспечивается ли стратегия немедленной тромбопрофилактики посредством эритроцитарного носительства scFv / TM или последующие итерации готовы к переводу в клиническую область.
Дополнительные материалы
Дополнительные методы, рисунки и видео: Благодарности
Эта работа была поддержана Национальными институтами здравоохранения (NIH) RO1 HL0^{и HL0 (V.R.M.) и NIH RO1 AI 037618 и R01 AI041592 (J.P.A.).}
Сноски
Онлайн-версия этой статьи содержит дополнение с данными.
Расходы на публикацию этой статьи были частично оплачены за счет оплаты страницы. Поэтому и исключительно для обозначения этого факта данная статья помечена как «реклама» в соответствии с разделом 18 USC 1734.
Авторство
Вклад: S.Z., V.R.M., D.B.C. и M.P. разработал исследование; D.S., C.T.E. и J.П.А. внесены жизненно важные новые реагенты; S.Z., B.-S.D., S.T., M.A.K., M.N., R.C. и A.S. провели эксперименты; S.Z., D.B.C., D.S., J.P.A., M.A.K., C.T.E., S.T., V.R.M. и M.P. проанализировали данные; и S.Z., D.B.C., M.P., C.T.E. и V.R.M. написал газету.
Раскрытие информации о конфликте интересов: авторы заявляют об отсутствии конкурирующих финансовых интересов.
Для корреспонденции: Владимир Р. Музыкантов, Медицинский факультет Перельмана, Университет Пенсильвании, Институт трансляционной медицины и терапии, Центр трансляционных исследований, 3400 Civic Center Blvd, Bldg 421, TRC 10-125, Philadelphia, PA 19104-5158; электронная почта: ude.nnepu.dem.liam@tnakyzum.
Ссылки
1. Голдсэк Н.Р., Чемберс Р.С., Даббаг К., Лоран Г.Дж. Тромбин. Int J Biochem Cell Biol. 1998. 30 (6): 641–646. [PubMed] [Google Scholar] 2. Эсмон CT. Воспаление и тромбоз. J Thromb Haemost. 2003. 1 (7): 1343–1348. [PubMed] [Google Scholar] 3. Боде В. Структура и способы взаимодействия тромбина. Blood Cells Mol Dis. 2006. 36 (2): 122–130. [PubMed] [Google Scholar] 4. Де Кристофаро Р., Де Кандиа Е. Домены тромбина: структура, функция и взаимодействие с рецепторами тромбоцитов.J Тромб Тромболизис. 2003. 15 (3): 151–163. [PubMed] [Google Scholar] 6. Coughlin SR. Передача сигналов тромбина и рецепторы, активируемые протеазой. Природа. 2000. 407 (6801): 258–264. [PubMed] [Google Scholar] 7. Эсмон CT. Воспаление и активация антикоагулянтного пути протеина С. Semin Thromb Hemost. 2006; 32 (Приложение 1): 49–60. [PubMed] [Google Scholar] 8. Weiler H, Isermann BH. Тромбомодулин. J Thromb Haemost. 2003. 1 (7): 1515–1524. [PubMed] [Google Scholar] 9. Эсмон CT. Рецептор Do-all принимает на себя коагуляцию, воспаление.Nat Med. 2005. 11 (5): 475–477. [PubMed] [Google Scholar] 10. Конвей Э.М., Розенберг РД. Фактор некроза опухоли подавляет транскрипцию гена тромбомодулина в эндотелиальных клетках. Mol Cell Biol. 1988. 8 (12): 5588–5592. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 11. Мур К.Л., Эсмон СТ, Эсмон Н.Л. Фактор некроза опухоли приводит к интернализации и деградации тромбомодулина с поверхности эндотелиальных клеток аорты крупного рогатого скота в культуре. Кровь. 1989. 73 (1): 159–165. [PubMed] [Google Scholar] 12. Sohn RH, Deming CB, Johns DC, et al.Регуляция экспрессии эндотелиального тромбомодулина воспалительными цитокинами опосредуется активацией ядерного фактора-каппа B. Кровь. 2005. 105 (10): 3910–3917. [PubMed] [Google Scholar] 13. Ким А.Ю., Валински П.Л., Колоджи Ф.Д. и др. Ранняя потеря экспрессии тромбомодулина снижает тромборезистентность венозного трансплантата: последствия для отказа венозного трансплантата. Circ Res. 2002. 90 (2): 205–212. [PubMed] [Google Scholar] 14. МакГрегор И.Р., Перри А.М., Доннелли С.К., Хаслетт С. Модуляция эндотелиального тромбомодулина человека нейтрофилами и продуктами их высвобождения.Am J Respir Crit Care Med. 1997. 155 (1): 47–52. [PubMed] [Google Scholar] 15. Терада Y, Eguchi Y, Nosaka S, Toba T, Nakamura T., Shimizu Y. Экспрессия капиллярного эндотелиального тромбомодулина и отложение фибрина у крыс с непрерывным и болюсным введением липополисахаридов. Lab Invest. 2003. 83 (8): 1165–1173. [PubMed] [Google Scholar] 16. Альбертсон С.М., Рихтер К.К., Кудрик Б.Дж., Финк Л.М., Хауэр-Йенсен М. Связь между снижением тромбомодулина эндотелиальных клеток легких и локальным отложением фибрина при пневмонии.Свертывание крови Фибринолиз. 2001. 12 (8): 729–733. [PubMed] [Google Scholar] 17. Хили А.М., Хэнкок В.В., Кристи П.Д., Рейберн Н.Б., Розенберг Р.Д. Активация внутрисосудистой коагуляции на мышиной модели дефицита тромбомодулина: влияние размера поражения, возраста и гипоксии на отложение фибрина. Кровь. 1998. 92 (11): 4188–4197. [PubMed] [Google Scholar] 18. Бернард Г.Р., Винсент Дж.Л., Латерир П.Ф. и др. Эффективность и безопасность рекомбинантного активированного протеина С человека при тяжелом сепсисе. N Engl J Med. 2001. 344 (10): 699–709.[PubMed] [Google Scholar] 19. Моснье Л.О., Злокович Б.В., Гриффин Дж. Х. Цитопротекторный путь протеина С. Кровь. 2007. 109 (8): 3161–3172. [PubMed] [Google Scholar] 20. Ченг Т., Лю Д., Гриффин Дж. Х. и др. Активированный протеин C блокирует p53-опосредованный апоптоз в ишемическом эндотелии головного мозга человека и обладает нейропротективным действием. Nat Med. 2003. 9 (3): 338–342. [PubMed] [Google Scholar] 21. Гриффин Дж. Х., Фернандес Дж. А., Лю Д., Ченг Т., Го Х., Злокович Б. В.. Активированный протеин С и ишемический инсульт. Crit Care Med. 2004; 32 (5 доп.): S247 – S253.[PubMed] [Google Scholar] 22. Контрерас Дж. Л., Экштейн С., Смит К. А. и др. Активированный протеин C сохраняет функциональную массу островков после интрапортальной трансплантации: новая связь между активацией эндотелиальных клеток, тромбозом, воспалением и гибелью островковых клеток. Сахарный диабет. 2004. 53 (11): 2804–2814. [PubMed] [Google Scholar] 23. Го Х., Лю Д., Гелбард Х. и др. Активированный протеин C предотвращает апоптоз нейронов через рецепторы 1 и 3, активируемые протеазой. Нейрон. 2004. 41 (4): 563–572. [PubMed] [Google Scholar] 24. Сайто Х., Маруяма И., Симадзаки С. и др.Эффективность и безопасность рекомбинантного растворимого тромбомодулина человека (ART-123) при диссеминированном внутрисосудистом свертывании: результаты рандомизированного двойного слепого клинического исследования фазы III. J Thromb Haemost. 2007. 5 (1): 31–41. [PubMed] [Google Scholar] 25. Кумада Т., Диттман В.А., Маджерус П.В. Роль тромбомодулина в патогенезе тромбин-индуцированной тромбоэмболии у мышей. Кровь. 1988. 71 (3): 728–733. [PubMed] [Google Scholar] 26. Дин Б.С., Хонг Н., Христофиду-Соломиду М. и др. Закрепление гибридного тромбомодулина в просвете эндотелия защищает от вызванного травмой тромбоза и воспаления легких.Am J Respir Crit Care Med. 2009. 180 (3): 247–256. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 27. Коллер Б.С., Спрингер К.Т., Бир Дж. Х. и др. Тромбоэритроциты: исследования in vitro потенциальной аутологичной, полуискусственной альтернативы переливанию тромбоцитов. J Clin Invest. 1992. 89 (2): 546–555. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 28. Murciano JC, Medinilla S, Eslin D, Atochina E, Cines DB, Музыкантов В.Р. Профилактический фибринолиз путем избирательного растворения образующихся сгустков эритроцитами, несущими tPA.Nat Biotechnol. 2003. 21 (8): 891–896. [PubMed] [Google Scholar] 29. Зайцев С., Даниелян К., Мурчиано Дж. К. и др. Нагрузка тканевого активатора плазминогена на циркулирующие эритроциты, направленная на рецептор комплемента типа 1 человека, для профилактического фибринолиза. Кровь. 2006. 108 (6): 1895–1902. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 30. Спитцер Д., Анзингер Дж., Бесслер М., Аткинсон Дж. П. ScFv-опосредованное нацеливание in vivo DAF на эритроциты ингибирует лизис комплементом. Мол Иммунол. 2004. 40 (13): 911–919. [PubMed] [Google Scholar] 31.Кина Т., Икута К., Такаяма Э. и др. Моноклональное антитело TER-119 распознает молекулу, связанную с гликофорином А, и специфически отмечает поздние стадии линии эритроидного происхождения у мышей. Br J Haematol. 2000. 109 (2): 280–287. [PubMed] [Google Scholar] 32. Зайцев С., Спитцер Д., Мурчиано Дж. С. и др. Устойчивая тромбопрофилактика, опосредованная зимогеном проурокиназы, нацеленным на эритроциты, активированным в месте образования сгустка. Кровь. 2010. 115 (25): 5241–5248. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 33. Дин Б.С., Хонг Н., Мурчиано Дж. К. и др.Профилактический тромболизис активированной тромбином латентной проурокиназы, направленной на PECAM-1 в легочной сосудистой сети. Кровь. 2008; 111 (4): 1999–2006. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 34. Динг Б.С., Готтштейн С., Грунов А. и др. Нацеливание на эндотелий рекомбинантной конструкции, объединяющей одноцепочечный вариабельный фрагмент антитела (scFv) PECAM-1 с проурокиназой, облегчает профилактический тромболизис в легочной сосудистой сети. Кровь. 2005. 106 (13): 4191–4198. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 35.Зайцев С., Спитцер Д., Мурчиано Дж. С. и др. Нацеливание мутантного активатора плазминогена на циркулирующие эритроциты для профилактики фибринолиза. J Pharmacol Exp Ther. 2010. 332 (3): 1022–1031. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 36. GUSTO Investigators. Международное рандомизированное исследование, сравнивающее четыре тромболитических стратегии при остром инфаркте миокарда. N Engl J Med. 1993. 329 (10): 673–682. [PubMed] [Google Scholar] 37. Эслин Д.Е., Чжан С., Сэмюэлс К.Дж. и др. Исследования на трансгенных мышах демонстрируют роль фактора 4 тромбоцитов в тромбозе: диссоциация между антикоагулянтным и антитромботическим действием гепарина.Кровь. 2004. 104 (10): 3173–3180. [PubMed] [Google Scholar] 38. Ли В., Чжэн Х, Гу Дж и др. Сверхэкспрессия рецептора протеина С эндотелиальных клеток изменяет гемостатический баланс и защищает мышей от эндотоксина. J Thromb Haemost. 2005. 3 (7): 1351–1359. [PubMed] [Google Scholar] 39. Яровой Х.В., Куфрин Д., Еслин Д.Е. и др. Фактор VIII эктопически экспрессируется в тромбоцитах: эффективность при лечении гемофилии А. Кровь. 2003. 102 (12): 4006–4013. [PubMed] [Google Scholar] 40. Куфрин Д., Эслин Д.Е., Бдейр К. и др. Антитромботические тромбоциты: эктопическая экспрессия активатора плазминогена урокиназного типа в тромбоцитах.Кровь. 2003. 102 (3): 926–933. [PubMed] [Google Scholar] 41. Neyman M, Gewirtz J, Poncz M. Анализ пространственных и временных характеристик сгустков на основе фактора VIII, доставляемых тромбоцитами. Кровь. 2008. 112 (4): 1101–1108. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 42. Ван YX, Wu C, Vincelette J и др. Усиленная антикоагулянтная активность тромбомодулина, нацеленного на тканевой фактор: проверка in vivo нейтрализующего тканевый фактор антитела, слитого с растворимым тромбомодулином. Thromb Haemost. 2006. 96 (3): 317–324.[PubMed] [Google Scholar] 43. Auffray I, Marfatia S, de Jong K и др. Димеризация гликофорина A и взаимодействие полосы 3 во время биогенеза эритроидной мембраны: исследования in vivo на трансгенных мышах человека с гликофорином A. Кровь. 2001. 97 (9): 2872–2878. [PubMed] [Google Scholar] 44. Anstee DJ. Природа и количество поверхностных гликопротеинов красных клеток человека. J Immunogenet. 1990. 17 (4): 219–225. [PubMed] [Google Scholar] 45. Часис Дж. А., Мохандас Н. Гликофорины красных кровяных телец. Кровь. 1992. 80 (8): 1869–1879. [PubMed] [Google Scholar] 46.Knowles DW, Chasis JA, Evans EA, Mohandas N. Совместное действие полосы 3 и гликофорина A в эритроцитах человека: иммобилизация полосы 3, индуцированная антителами к гликофорину A. Biophys J. 1994; 66 (5): 1726-1732. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 47. Mqadmi A, Abramowitz S, Zheng X, Yazdanbakhsh K. Уменьшение разрушения эритроцитов фрагментами антител. Иммуногематология. 2006; 22 (1): 11–14. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 48. Спитцер Д., Ву Х, Ма Х, Сюй Л., Думминг К.П., Аткинсон Дж. П.Передний край: лечение дефицита регуляторного белка комплемента с помощью ретровирусной генной терапии in vivo. J Immunol. 2006. 177 (8): 4953–4956. [PubMed] [Google Scholar] 49. Эсмон CT. Взаимосвязь между воспалением и тромбозом. Maturitas. 2008. 61 (1): 122–131. [PubMed] [Google Scholar] 50. Конвей Э.М. Тромбомодулин и его роль в воспалении. Semin Immunopathol. 2012. 34 (1): 107–125. [PubMed] [Google Scholar] Максим Зайцев, Атланта, Джорджия
ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ: В нашей базе данных есть 2 кредита ГЧП на общую сумму 39 585 долларов США для предприятий с именем «Максим Зайцев» в Атланте, штат Джорджия.Обычно это происходит из-за того, что один и тот же бизнес получает ссуды как первой, так и второй выдачи, но может также включать в себя одноименные, но не связанные между собой предприятия, несколько филиалов одного и того же бизнеса, ошибочные несколько заявок или потенциальное мошенничество. Щелкните каждую ссуду ниже, чтобы увидеть полную информацию.
Максим Зайцев — индивидуальное предприятие, расположенное в Атланте, штат Джорджия, которое в апреле 2021 года получило от SBA заем в рамках ГЧП в связи с коронавирусом в размере $ 19 792,00 .
Компания заявила о себе как о бизнесе, принадлежащем мужчинам, и наняла по крайней мере одного человека в течение соответствующего периода ссуды.
$
Информация о займе ГЧП
Заем № 7593438705
Максим Зайцев в Атланте, Джорджия, получил через Itria Ventures LLC заем на выплату зарплаты в размере 19 792 долларов США, который был одобрен в апреле 2021 года.
Этот заем был предоставлен кредитором и еще не полностью погашен или прощен. SBA не разглашает точный статус текущих займов.
Расчет ГЧП Примечание: Общая сумма кредита ГЧП, которую может получить правомочное предприятие или физическое лицо, основывается на 2.В 5 раз больше их среднемесячных расходов на заработную плату в 2019 году, равных , максимум 100000 долларов США в год на одного сотрудника.
Сообщение об использовании процесса ГЧП:
В заявке на ГЧП Максим Зайцев сообщил о намерении использовать средства от займа ГЧП на следующие расходы:
Заработная плата: 19 786 долларов
Коммунальные услуги: 1
долларов Деловая информация — Максим Зайцев в Атланте, GA
Похожие компании рядом с Atlanta
В районе Атланты 23 предприятия в сфере управления жилой недвижимостью получили ссуду в рамках ГЧП.Эти местные предприятия сообщили в среднем о 4 сотрудниках (по сравнению с 1 этой компанией) и получили среднюю ссуду ГЧП в размере 36 053 долл. США (по сравнению с 19 792 долл. США этой компании) .
Похожие компании поблизости, получившие финансирование в рамках ГЧП:
John Adamson LLC
Chamblee, GA
$ 15 832 заем ГЧП Ramstead Holdings LLC
Атланта, Джорджия
$ 11 250 заем ГЧП ASO Holdings Inc
Атланта, Джорджия
$ 11 875 заем ГЧП Кори Уайтсайд
Атланта, Джорджия
$ 20 832 заем ГЧП Апартаменты At Sugarmill LLLP
Atlanta, GA
$ 48 798 заем ГЧП Woodruff Walden LLC
Атланта, Джорджия
$ 49 427 заем ГЧП Citiside Properties LLC
Атланта, Джорджия
$ 38 462 заем ГЧП Erdace Management, LLC
Атланта, Джорджия
$ 77 500 заем ГЧП Статистика сравнения отраслевых ППС
По всей стране 36 628 предприятий, занимающихся управлением жилой недвижимостью, получили в общей сложности 3 доллара США.05B в займах ГЧП.
В целом эта отрасль получила менее 1% от общего распределенного финансирования ГЧП.
Получатели ГЧП в этой отрасли сообщают в среднем о 9 сотрудниках ,
На 800% больше, чем , чем у Максима Зайцева, о котором сообщил 1 сотрудник, и получил в среднем ссуды ГЧП в размере 83 394 долларов США, что на 321% больше, чем ссуды этой компании в размере 19 792 долларов США.
Максим Зайцев — индивидуальное предприятие, расположенное в Атланте, штат Джорджия, которое получило от SBA ссуду на ГЧП в связи с коронавирусом в размере $ 19 793.00 в феврале 2021 г.
Компания заявила о себе как о бизнесе, принадлежащем мужчинам, и наняла по крайней мере одного человека в течение соответствующего периода ссуды.
$
Информация о займе ГЧП
Заем № 2177698406
Максим Зайцев в Атланте, Джорджия, получил через Itria Ventures LLC заем на выплату зарплаты в размере 19 793 долларов США, который был одобрен в феврале 2021 года.
Этот заем был предоставлен кредитором и еще не полностью погашен или прощен.SBA не разглашает точный статус текущих займов.
Расчет ГЧП Примечание: Общая сумма кредита ГЧП, которую может получить правомочное предприятие или физическое лицо, основывается на 2,5-кратном размере их среднемесячных расходов на заработную плату в 2019 году , ограниченных 100000 долларов США в год на одного сотрудника.
Сообщение об использовании процесса ГЧП:
В заявке на ГЧП Максим Зайцев сообщил о намерении использовать средства от займа ГЧП на следующие расходы:
Заработная плата: 19 787 долларов
Коммунальные услуги: 1
долларов Деловая информация — Максим Зайцев в Атланте, GA
Похожие компании рядом с Atlanta
В районе Атланты 23 предприятия в сфере управления жилой недвижимостью получили ссуду в рамках ГЧП.Эти местные предприятия сообщили в среднем о 4 сотрудниках (по сравнению с 1 этой компанией) и получили среднюю ссуду ГЧП в размере $ 36 053 (по сравнению с 19 793 $ этой компании) .
Похожие компании поблизости, получившие финансирование в рамках ГЧП:
John Adamson LLC
Chamblee, GA
$ 15 832 заем ГЧП Ramstead Holdings LLC
Атланта, Джорджия
$ 11 250 заем ГЧП ASO Holdings Inc
Атланта, Джорджия
$ 11 875 заем ГЧП Кори Уайтсайд
Атланта, Джорджия
$ 20 832 заем ГЧП Апартаменты At Sugarmill LLLP
Atlanta, GA
$ 48 798 заем ГЧП Woodruff Walden LLC
Атланта, Джорджия
$ 49 427 заем ГЧП Citiside Properties LLC
Атланта, Джорджия
$ 38 462 заем ГЧП Erdace Management, LLC
Атланта, Джорджия
$ 77 500 заем ГЧП Статистика сравнения отраслевых ППС
По всей стране 36 628 предприятий, занимающихся управлением жилой недвижимостью, получили в общей сложности 3 доллара США.05B в займах ГЧП.
В целом эта отрасль получила менее 1% от общего распределенного финансирования ГЧП.
Получатели ГЧП в этой отрасли сообщают в среднем о 9 сотрудниках ,
На 800% больше , чем у Максима Зайцева 1 сотрудник, и он получил в среднем ссуды ГЧП в размере 83 394 долларов, что на 321% больше, чем ссуды этой компании в размере 19 793 долларов.
Информационная политика FederalPay в области ГЧП
Данные о ссуде с защитой зарплаты были опубликованы Управлением малого бизнеса (SBA) для всех частных компаний, получивших ссуду в рамках ГЧП.
Вся информация, отображаемая на этой странице, является общедоступной в соответствии с руководящими принципами по кредитованию ГЧП в соответствии с 5 U.S.C. § 552 (Закон о свободе информации) и 5 U.S.C. § 552a (Закон о конфиденциальности) и публикуется без изменений, как это предусмотрено SBA. FederalPay не изменяет данные и не претендует на их точность.
Любые исправления или модификации этих данных могут быть сделаны только через SBA. Для получения дополнительной информации см. Политику в отношении данных FederalPay PPP.
1. Оценки исключительно в информационных целях. Расчет заработной платы и оценки заработной платы предполагают, что заемщик использовал стандартный расчет ППС 2,5 х среднемесячные расходы на заработную плату за 2019 год для определения права на получение кредита ГЧП. Методы расчета зависят от типа объекта. Пожалуйста, ознакомьтесь с последними официальными правилами расчета ГЧП SBA для полного объяснения методов расчета суммы кредита ГЧП.
2. Если зарегистрированное количество сотрудников компании, разделенное на максимальную сумму диапазона ППС в соответствии с SBA, превышает 100 000 долларов, расчетный максимальный размер кредита, полученного компанией, может быть скорректирован, чтобы предположить, что годовая зарплата на одного сотрудника не превышала 100 000 долларов. используется в приложении PPP.Хотя сотрудники компании могут зарабатывать больше, 100 тысяч долларов на сотрудника — это максимальная сумма, которую можно использовать при расчетах права на участие в программе ГЧП.
Были ли полезны инструменты открытых данных FederalPay.org? Рассмотрите возможность пожертвования!
Биография
ПАРЫ
Дата рождения: 16.04.1999 Кристина ЗАЙЦЕВ
США
Место рождения: Индианаполис IN
Высота: 152
размеры в см
Родной город: Рыбаки ИН
Профессия: старшеклассник
Хобби: пение, чтение, верховая езда
Старт ск./ Клуб: 2005 г.
/
Мировая академия конькобежного спорта Индианы
Бывшие партнеры
Дата рождения: 31.12.1993 Эрни Юта СТИВЕНС
США
Место рождения: Луисвилл
Высота: 181
размеры в см
Родной город: Луисвилл
Профессия: студент
Хобби: фотография, письмо, чтение
Старт ск./ Клуб: 2002 г.
/
IWSA FSC
Бывшие партнеры
Тренер: Сергей Зайцев
Хореограф: Shanetta Folle
Бывший тренер:
Низкий сезон практики: 25
ч / неделя
в Carmel IN
Высокий сезон практики: 25
ч / неделя
в Carmel IN
Музыка Короткая программа / Короткий танец по сезону
2013/2014
Дай мне, дай мне больше от Abba
Музыка Произвольное катание / Произвольный танец в зависимости от сезона
2013/2014
Фантазия-экспромт Фредерика Шопена в исполнении Стэнли Блэка
Лучший личный результат 112.17 27.09.2013 ISU JGP Minsk 2013
Персональный лучший результат Короткая программа 42,59 26.09.2013 ISU JGP Minsk 2013
Личный результат Произвольное катание 69,58 27.09.2013 ISU JGP Minsk 2013
07.06. 07/08 09.08. 09/10 10/11 11/12 13.12. 13/14
Олимпийские игры
Чемпион мира.
Чемпион Европы.
Четыре континента
Чемпионат Мира среди юниоров
Национальный чемпион.
S = старший; J = Юниор; N = новичок
Международный конкурс Год Место
ISU JGP Croatia Cup 2012 Загреб 2012 11.J
ISU JGP Riga Cup 2013 Рига 2013 8. J Международный конкурс Год Место
ISU JGP Minsk 2013 Минск 2013 6.J
Пару тренирует отец Зайцева. Сергей Зайцев выступал на международном уровне в парном катании, представляя Советский Союз, в 80-е годы.
Разное
Post navigation
Пошлый вопрос парню по переписке: 170 лучших вопросов, которые можно задать парню в переписки или на свидании
Долгий поцелуй в губы с языком: Как правильно целоваться в губы разными видами поцелуев: французским, итальянским, без языка, взасос? | Cozy home
Добавить комментарий Отменить ответ
Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *
Comment *
Name *
Email *
Website
Save my name, email, and website in this browser for the next time I comment

Рубрики
Воспитывать
Дети
Подростка
Разное
Семья
Советы
© 2024 НОУ СОШ «Семья и Школа»}}}}